Legionella -suvun bakteerien määrittäminen kvantitatiivisella Multiplex qPCR menetelmällä
Konstantinova, Veronika (2021)
2021
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202101121193
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202101121193
Tiivistelmä
Opinnäytetyö toteutettiin MetropoliLab:in toimipisteessä, mikrobiologian laboratoriossa. Opinnäytetyön tavoitteena oli verifioida laboratoriolle uusi menetelmä, jonka avulla voidaan määrittää Legionella-suvun bakteerien pitoisuutta verkostovesinäytteistä kvantitativiiseen qPCR-menetelmän avulla. Menetelmä tehdään kaupallisella Legionella quantification LyoKit menetelmällä, jonka valmistajan Biotecon Diagnostics on validoinut standardin ISO/TS 12869:2019 -mukaan ja laboratorion pitää tehdä menetelmälle käyttöönottoverifiointi.
Kiinteistöjen vesijärjestelmiin pääsee pieniä määriä mikrobeja vesilaitosten käsittelemän veden mukana, vesijärjestelmissä mikrobit lisääntyvät. Tunnetuimpia taudinaiheuttajia vesijärjestelmissä ovat Legionella-bakteerit, jotka voivat aiheuttaa infektion päästyään muodostuneen aerosolin mukana hengitysteihin. Legionella pneumophila on patogeeni, joka voi aiheuttaa ihmisessä keuhkotulehduksia. Myös muut Legionella-suvun bakteerit voivat aiheuttaa ihmiselle vakavia oireita.
EU:n juomavesidirektiivin muutoksiin ollaan lisäämässä ensimmäistä kertaa Legionellojen riskinarvio kiinteistöille sekä raja-arvot kylmässä talousvedessä ja lämpimässä käyttövedessä. Legionella-suvun bakteerien määrittäminen kvantitatiivisella qPCR menetelmällä säästää paljon aikaa verrattuna viljelymenetelmään, sillä viljelyn inkubointiaika on kymmenen vuorokautta, kun taas qPCR-menetelmällä tulokset saadaan samana päivänä.
Verifiointiaineiston ja referenssimenetelmävertailun perusteella viljelymenetelmän ja kvantitatiivisen PCR-menetelmän välille löydettiin vastaavuus. Kaikkia parametreja ei voitu tutkia näytteiden ja ajan rajallisuuden vuoksi. Menetelmää ei voida käyttöönottaa laboratoriossa ennen kuin menetelmän oikeellisuus on varmistettu ulkoisen vertailumittauksen avulla. Tämä määritys jäi pois opinnäytetyöstä aikataulun takia.
Kiinteistöjen vesijärjestelmiin pääsee pieniä määriä mikrobeja vesilaitosten käsittelemän veden mukana, vesijärjestelmissä mikrobit lisääntyvät. Tunnetuimpia taudinaiheuttajia vesijärjestelmissä ovat Legionella-bakteerit, jotka voivat aiheuttaa infektion päästyään muodostuneen aerosolin mukana hengitysteihin. Legionella pneumophila on patogeeni, joka voi aiheuttaa ihmisessä keuhkotulehduksia. Myös muut Legionella-suvun bakteerit voivat aiheuttaa ihmiselle vakavia oireita.
EU:n juomavesidirektiivin muutoksiin ollaan lisäämässä ensimmäistä kertaa Legionellojen riskinarvio kiinteistöille sekä raja-arvot kylmässä talousvedessä ja lämpimässä käyttövedessä. Legionella-suvun bakteerien määrittäminen kvantitatiivisella qPCR menetelmällä säästää paljon aikaa verrattuna viljelymenetelmään, sillä viljelyn inkubointiaika on kymmenen vuorokautta, kun taas qPCR-menetelmällä tulokset saadaan samana päivänä.
Verifiointiaineiston ja referenssimenetelmävertailun perusteella viljelymenetelmän ja kvantitatiivisen PCR-menetelmän välille löydettiin vastaavuus. Kaikkia parametreja ei voitu tutkia näytteiden ja ajan rajallisuuden vuoksi. Menetelmää ei voida käyttöönottaa laboratoriossa ennen kuin menetelmän oikeellisuus on varmistettu ulkoisen vertailumittauksen avulla. Tämä määritys jäi pois opinnäytetyöstä aikataulun takia.