Hybridoomasolun sisältämän vasta-ainegeenin monistaminen ja kloonaaminen sekvensointivektoriin
Keskitalo, Leena (2011)
Oulun seudun ammattikorkeakoulu
2011
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2011120116772
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2011120116772
Tiivistelmä
Työn tavoitteena oli monistaa hybridoomasolun sisältämä vasta-aineen geeni ja siirtää se sekvensointivektoriin. Hybridooma on fuusiosolu, jossa on yhdistetty immunisoidun hiiren pernan vasta-ainetta tuottava solu sekä ATCC-solupankista ostettu syöpäsolukanta, joka on hiiren pernan lymfoomasyöpäsolulinja.
pShuttle-CMV-tuottovektori, johon monistettu ja muokattu vasta-ainegeeni voidaan siirtää, valmistettiin ensin. Seuraavaksi tuotettiin tarvittava määrä nisäkässolumateriaalia, josta eristettiin totaali-RNA. Eristettyä RNA:ta käytettiin materiaalina cDNA-synteesissä, jonka jälkeen tehtiin PCR I ja II -monistuskierrokset. Vasta-ainegeenin monistuksessa monistetaan aina erikseen sekä kevyt että raskas ketju. Molempiin käytetään siis omia alukkeita ja niille tehdään omat cDNA-synteesit ja PCR-reaktiot. Monistettu geeni siirrettiin kaupalliseen sekvensointivektoriin, varmistettiin siirron onnistuminen testidigestiolla ja pesäke-PCR:llä sekä vietiin vektoriin siirretty geeni sekvensoitavaksi.
pShuttle-CMV–tuottovektorin valmistus onnistui ja vasta-ainegeeni-insertin siirto sekvensointivektoriin todennettiin. Opinnäytetyö suoritettiin Oulun yliopiston, Biolääketieteen laitoksen fysiologian yksikössä. Työ liittyy laajempaan Biocenter Oulun EAKR-hankkeeseen ”Biopalvelut kilpailukykyisiksi tuotteiksi”, jossa kehitetään menetelmiä ja työskentely-ympäristöjä palvelemaan entistä paremmin terveys- ja hyvinvointialan sekä bioalan tutkimuslaitoksia ja yrittäjiä.
pShuttle-CMV-tuottovektori, johon monistettu ja muokattu vasta-ainegeeni voidaan siirtää, valmistettiin ensin. Seuraavaksi tuotettiin tarvittava määrä nisäkässolumateriaalia, josta eristettiin totaali-RNA. Eristettyä RNA:ta käytettiin materiaalina cDNA-synteesissä, jonka jälkeen tehtiin PCR I ja II -monistuskierrokset. Vasta-ainegeenin monistuksessa monistetaan aina erikseen sekä kevyt että raskas ketju. Molempiin käytetään siis omia alukkeita ja niille tehdään omat cDNA-synteesit ja PCR-reaktiot. Monistettu geeni siirrettiin kaupalliseen sekvensointivektoriin, varmistettiin siirron onnistuminen testidigestiolla ja pesäke-PCR:llä sekä vietiin vektoriin siirretty geeni sekvensoitavaksi.
pShuttle-CMV–tuottovektorin valmistus onnistui ja vasta-ainegeeni-insertin siirto sekvensointivektoriin todennettiin. Opinnäytetyö suoritettiin Oulun yliopiston, Biolääketieteen laitoksen fysiologian yksikössä. Työ liittyy laajempaan Biocenter Oulun EAKR-hankkeeseen ”Biopalvelut kilpailukykyisiksi tuotteiksi”, jossa kehitetään menetelmiä ja työskentely-ympäristöjä palvelemaan entistä paremmin terveys- ja hyvinvointialan sekä bioalan tutkimuslaitoksia ja yrittäjiä.