Automaattisen homositrulliinivasta-aineita mittaavan laboratoriomenetelmän pystytys ja validointi

Abstract

Tämän opinnäytetyön tavoitteena oli pystyttää ja validoida homositrulliinivasta-aineita mittaava laboratoriomenetelmä IDS-iSYS-immunoanalysaattorille. Työn toimeksiantaja oli Oulun yliopiston Diagnostiikan laitoksen Kliinisen kemian laboratorio. Lähtökohtana työlle olivat jo aikaisemmin tilaajan tutkimusryhmässä kehitetyt sitrulliinivasta-aineita mittaava inhibitio-CLIA (kemiluminesenssiin perustuva immunomääritysmenetelmä) sekä homositrulliinivasta-aineita mittaava manuaalinen inhibitio-ELISA (entsyymi-immunologinen menetelmä). Tarkoituksena oli tuottaa tutkimuskäyttöön hyvän toistotarkkuuden, sensitiivisyyden ja spesifisyyden omaava automaattinen laboratoriomenetelmä.

Laboratoriomenetelmän kehittäminen liittyy nivelreumassa esiintyvien kollageeneihin sitoutuvien autovasta-aineiden tutkimiseen. Esimerkiksi sitrullinisoituneet proteiinit voivat aiheuttaa elimistössä autovasta-aineiden muodostumista, ja suurimmalla osalla nivelreumapotilaista esiintyykin sitrulliinivasta-aineita. Homositrulliini ja sitrulliini ovat hyvin samankaltaisia aminohappoja, jotka syntyvät post-translationaalisten muokkausten kautta. On todettu, että sitrulliinivasta-aineet ristireagoivat homositrulliinin kanssa. Lisäksi homositrullinisoituneilla proteiineilla voi olla merkitystä sitrulliinivasta-aineiden syntymisessä ja siten nivelreuman etiologiassa.

Aineistona käytettiin nivelreumapotilaiden ja nivelreuman suhteen terveiden kontrollien seeruminäytteitä sekä tunnetun homositrulliinivasta-ainetason omaavia näytteitä eli laatukontrolleja. Menetelmän optimointivaiheessa muokattiin sitrulliinivasta-aineita mittaavaa inhibitio-CLIA-ohjelmaa näytelaimennoksen, sekundaarisen vasta-aineen ja liukoisen inhibiittoripeptidin suhteen. Validointivaiheessa määritettiin potilas- ja kontrolliaineistoista homositrulliinivasta-aineet ja saatuja tuloksia verrattiin manuaalisen inhibitio-ELISA:n antamiin tuloksiin. Potilas- ja kontrolliaineistojen perusteella analysoitiin tilastollisesti menetelmän sensitiivisyys ja spesifisyys. Analyysisarjoissa mukana olleiden laatukontrollinäytteiden perusteella analysoitiin menetelmän toistotarkkuus.

Pystytetty homositrulliinivasta-aineita mittaava inhibitio-CLIA vaikuttaa olevan hyvä työkalu tulevaa tutkimustyötä varten. Sen toistotarkkuus on hyvä ja sensitiivisyys sekä spesifisyys ovat samaa luokkaa referenssimenetelmänä käytetyn inhibitio-ELISA:n kanssa. Opinnäytetyön tavoitteeseen siis päästiin, mutta menetelmää voi tarpeen mukaan kehittää edelleen.