Jäännösvalkosolujen määritys virtaussytometrisesti veri- ja soluvalmisteista : LeukoSure™-menetelmän validointi Navios™-virtaussytometreille – SPR Veripalvelu

Abstract

Opinnäytetyön tarkoituksena oli validoida Suomen Punaisen Ristin Veripalvelun laadunvalvontalaboratorioon vaihtoehtoinen jäännösvalkosolujen kvantitoimiseen tarkoitettu tutkimusmenetelmä Beckman-Coulter LeukoSure™ Beckman-Coulter Navios™ -virtaussytometreille. Veripalvelutoiminnan laatuvaatimusten mukaisesti veri- ja soluvalmisteiden tulee olla valkosoluttomia, sillä valmisteisiin jääneet valkosolut voivat aiheuttaa potilaalle verensiirron haittavaikutuksen, joka voi ilmetä esimerkiksi lievänä kuumereaktiona tai henkeä uhkaavana käänteishyljintäreaktiona (TA-GVHD eli Transfusion Associated Graft-Versus-Host Disease). Validoinnin tutkimusaineistoa olivat valkosoluttomat punasoluvalmisteet (PSVS; n=20), valkosoluttomat trombosyyttivalmisteet (TRVS4; n=20) sekä valkosoluttomat hemafereesillä kerätyt trombosyyttivalmisteet (TRFVS4; n=3). Lisäksi validoinnissa käytettiin menetelmävalmistajan kontrolleja punasolu- ja trombosyyttimatriiseissa ja menetelmä osallistui ulkoiselle laadunvalvontakierrokselle (UK NEQAS matalan tason valkosolut). Vertailumenetelmänä käytettiin Becton-Dickinson Leucocount™ -menetelmää. LeukoSure™-menetelmän validoinnin tulokset täyttivät validointisuunnitelmassa asetetut hyväksymiskriteerit. Menetelmän lineaarisuus (R2) oli ≥ 0,991, mittausalue oli 0,4–42 x106 valkosolua/l, menetelmävertailun tasoero oli -37–20 %, mittausepävarmuus tasolla 2–3 x106 valkosolua/l oli 87 % ja oikeellisuus (z-score) oli ≤ 2. Validoinnin perusteella LeukoSure™-menetelmä soveltuu jäännösvalkosolujen kvantitatiiviseen laskentaan veri- ja soluvalmisteista. LeukoSure™ voidaan ottaa SPR Veripalvelun laadunvalvontalaboratoriossa Leucocount™-menetelmän varamenetelmäksi, mutta sen käyttöönotto vaatii lisävalidointeja, joissa tarkennetaan mittausepävarmuutta. Validoinnin aikana toisen rinnakkaisen Navios™-virtaussytometrin asetuksia täytyi muuttaa, joten kyseisen analysaattorin tulostason oikeellisuus tulisi osoittaa lisävalidointien avulla.

The purpose of this study was to test if Beckman-Coulter LeukoSure™ method may be reliably used to enumerate the residual leucocytes in leucoreduced red blood cell and platelet products with Beckman-Coulter Navios™ flow cytometer in the Finnish Red Cross Blood Service quality control laboratory. According to the quality principles of blood service operations, all red blood cell and platelet products must be leucoreduced to prevent deleterious post-transfusion events that may cause light fever or even life threatening transfusion associated graft-versus-host disease to the patient.

The specimen of the validation were leucoreduced red blood cell products (n=20), leucoreduced platelet products (n=20) and leucoreduced platelet products that were collected by automated apheresis (n=3). In addition, a number of control samples and three external quality control samples (UK NEQAS Low Level Leucocyte) were analyzed. Becton-Dickinson Leucocount™ was used as a reference method.

The results of the validation of the LeukoSure™ method fulfilled the criteria that were set beforehand: the linearity (R2) was ≥ 0,991, the measuring range was 0,4–42 x106 leucocyte /l, the bias in the method comparison was -37–20%, the measurement uncertainty was 87% at the level 2–3 x106 leucocyte/l and the accuracy (z-score) was ≤ 2.

Based on the results of the validation, LeukoSure™ method can be used to enumerate the residual leucocytes in leucoreduced red blood cell and platelet products. The method may be used as a backup method in the Finnish Red Cross Blood Service quality control laboratory. However, additional validations must be performed before the LeukoSure™ method can be considered as reliable as the laboratory’s current enumeration method Leucocount™.