E-kadheriinin ilmentymisen havainnointi eukaryoottisoluissa fluoresoivan reportterin avulla
Peltonen, Laura; Tervonen, Juho (2012)
Peltonen, Laura
Tervonen, Juho
Oulun seudun ammattikorkeakoulu
2012
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012113017559
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012113017559
Tiivistelmä
Opinnäytetyömme aiheena oli havainnoida ja havainnollistaa eukaryoottisolujen muuntumista mesenkymaalisen solulinjan solusta epiteelisoluksi. Havainnoimme epiteelisoluille tyypillisen pintaproteiinin, E-kadheriinin, ilmentymistä eri kehitysvaiheissa olevien solulinjojen immunovärjäyksillä. Lisäksi tutkimme, voiko solujen muuntumisprosessia solutyypistä toiseksi havaita viemällä soluun sisälle E-kadheriinin promoottorilla toimiva reportterigeeni. Tutkimme myös, miten eri indusoivat aineet vaikuttivat E-kadheriinin ekspressioon solukalvon pinnalla.
Tutkimuksen taustalla oli tarve kehittää menetelmä, jolla voitaisiin seuloa potentiaalisia munuaisen kehitykseen vaikuttavia transkriptiotekijöitä. Nykyisin käytössä oleviin menetelmiin kuuluu mahdollisten transkriptiotekijöiden tutkiminen hiirimalleilla, joka tutkimuksena kestää pitkään ja on kallista. Solumalli, joka pystyisi reportterigeenin avulla kertomaan solutyypin muuttumisesta mesenkymaalisesta epiteeliksi, nopeuttaisi huomattavasti olemassa olevaa tutkimusta.
Kokeilemistamme vektoreista yksi osoittautui hieman muita toimivammaksi E-kadheriiniekspression ilmentäjäksi. Lisäksi havaitsimme, että käyttämämme MK3- ja MK4-solulinjat eivät ilmentäneet E-kadheriinia odotetusti ja että ekspressio lisääntyy induktorien vaikutuksesta. Saamiemme tulosten pohjalta tutkimusryhmä saattoi edetä suunnittelemaan vektoreilla tehtävää pysyvää transfektioktiota, minkä tarkoituksena on pystyä lopulta tekemään seulontatestejä transkriptiofaktoreille.
Tutkimuksen taustalla oli tarve kehittää menetelmä, jolla voitaisiin seuloa potentiaalisia munuaisen kehitykseen vaikuttavia transkriptiotekijöitä. Nykyisin käytössä oleviin menetelmiin kuuluu mahdollisten transkriptiotekijöiden tutkiminen hiirimalleilla, joka tutkimuksena kestää pitkään ja on kallista. Solumalli, joka pystyisi reportterigeenin avulla kertomaan solutyypin muuttumisesta mesenkymaalisesta epiteeliksi, nopeuttaisi huomattavasti olemassa olevaa tutkimusta.
Kokeilemistamme vektoreista yksi osoittautui hieman muita toimivammaksi E-kadheriiniekspression ilmentäjäksi. Lisäksi havaitsimme, että käyttämämme MK3- ja MK4-solulinjat eivät ilmentäneet E-kadheriinia odotetusti ja että ekspressio lisääntyy induktorien vaikutuksesta. Saamiemme tulosten pohjalta tutkimusryhmä saattoi edetä suunnittelemaan vektoreilla tehtävää pysyvää transfektioktiota, minkä tarkoituksena on pystyä lopulta tekemään seulontatestejä transkriptiofaktoreille.