Lactobacillus amylovorus -kantojen pintakerrosproteiinien kloonaus ja ilmentäminen
Torppa, Oskari (2013)
Torppa, Oskari
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2013
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013061914391
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013061914391
Tiivistelmä
Tämä opinnäytetyö toteutettiin Helsingin yliopiston eläinlääketieteellisen tiedekunnan eläinlääketieteellisten biotieteiden osastolla, mikrobiologian ja epidemiologian oppiaineessa.
Pintakerrosproteiinit ovat molekyylipainoltaan 40 - 200 kDa:n painoisia proteiineja, jotka muodostavat monien bakteerien ja arkkien soluseinän uloimman kerroksen. Ne järjestäytyvät solun pinnalle huokoisiksi hilarakenteiksi. Pintakerrosproteiinien on todettu muun muassa suojaavan solua, toimivan kiinnityskohtana entsyymeille ja auttavan bakteeria kiinnittymään kudosten pinnoille.
Tämän työn tavoitteena oli kloonata kolmen eri Lactobacillus amylovorus -kannan (GRL1114, GRL1116 ja GRL1117) pinnalleen ilmentämien pintakerrosproteiinien koodaavat geenit ja puhdistaa rekombinanttipintakerrosproteiineja tulevaisuudessa tehtäviä jatkotutkimuksia varten.
L. amylovorus -kantojen kromosomaalisesta DNA:sta monistettiin PCR:llä pintakerrosproteiineja koodaava slp-geeni. GRL1114- ja GRL1116-kannoista monistettiin molemmista yksi slp-geeni ja GRL1117-kannasta kaksi eri slp-geeniä. Geenit ligoitiin pET-28b(+) -vektoriin ja transformoitiin Escherichia coli XL1 Blue -kantaan.
Rekombinanttipintakerrosproteiinit tuotettiin E. coli ekspressiosoluissa IPTG-induktion avulla. Proteiinit puhdistettiin affiniteettikromatografian avulla. Kaikkien pintakerrosproteiinigeenien kloonaus ja ilmentäminen onnistui. Tuotettujen pintakerrosproteiinien koot vaihtelivat 45 ja 66 kDa:n välillä ja niiden saannot olivat 1,76 - 3,76 mg.
Pintakerrosproteiinit ovat molekyylipainoltaan 40 - 200 kDa:n painoisia proteiineja, jotka muodostavat monien bakteerien ja arkkien soluseinän uloimman kerroksen. Ne järjestäytyvät solun pinnalle huokoisiksi hilarakenteiksi. Pintakerrosproteiinien on todettu muun muassa suojaavan solua, toimivan kiinnityskohtana entsyymeille ja auttavan bakteeria kiinnittymään kudosten pinnoille.
Tämän työn tavoitteena oli kloonata kolmen eri Lactobacillus amylovorus -kannan (GRL1114, GRL1116 ja GRL1117) pinnalleen ilmentämien pintakerrosproteiinien koodaavat geenit ja puhdistaa rekombinanttipintakerrosproteiineja tulevaisuudessa tehtäviä jatkotutkimuksia varten.
L. amylovorus -kantojen kromosomaalisesta DNA:sta monistettiin PCR:llä pintakerrosproteiineja koodaava slp-geeni. GRL1114- ja GRL1116-kannoista monistettiin molemmista yksi slp-geeni ja GRL1117-kannasta kaksi eri slp-geeniä. Geenit ligoitiin pET-28b(+) -vektoriin ja transformoitiin Escherichia coli XL1 Blue -kantaan.
Rekombinanttipintakerrosproteiinit tuotettiin E. coli ekspressiosoluissa IPTG-induktion avulla. Proteiinit puhdistettiin affiniteettikromatografian avulla. Kaikkien pintakerrosproteiinigeenien kloonaus ja ilmentäminen onnistui. Tuotettujen pintakerrosproteiinien koot vaihtelivat 45 ja 66 kDa:n välillä ja niiden saannot olivat 1,76 - 3,76 mg.