Valkosolusopivuuskokeen pystytys ja validointi Beckman Coulterin Navios™-virtaussytometrille

Abstract

Opinnäytetyö tehtiin Punaisen Ristin Veripalvelulle. Työn tavoitteena oli pystyttää ja validoida valkosolusopivuuskoemenetelmä Beckman Coulterin Navios™ -virtaussytometrille. Menetelmää hyödynnetään mm. munuaisensiirron jälkeisessä hoidossa, jos siirretty munuainen ei käynnisty normaalilla tavalla tai epäillään hyljintää. Tarkoituksena oli luoda Navios™ -virtaussytometrille oikeat asetukset valkosolusopivuuskoemenetelmälle ja määrittää positiiviset raja-arvot (T- ja B-IgG sekä T-IgM). Valittiin uudet T- ja B-solumerkkiaineet, jotka fluoresoivat selkeästi eri aallonpituutta, jolloin vältytään hankalilta ajoasetusten säädöiltä. Pystytyksen jälkeen menetelmä validoitiin. Aineistona käytettiin perifeerisen veren soluja, syväjäässä säilytettyjä elinluovuttajan pernan soluja sekä pakastettuja munuaispotilaiden seeruminäytteitä. Seerumit oli valittu siten, että mukana oli negatiivisia, heikosti positiivisia ja vahvasti positiivisia näytteitä. Analyysisarjoissa oli mukana myös tunnettu negatiivinen kontrolli sekä tunnettu positiivinen kontrolli, joiden perusteella analysoitiin menetelmän toistotarkkuutta. Asetettujen hyväksymiskriteerien ja tavoitteiden avulla, validoinnissa saadut tulokset herkkyys (sensitiivisyys) ja tarkkuus (spesifisyys) oli tavoitteiden mukaiset. Tulokset vastasivat käytössä olevalla menetelmällä saatuja alkuperäisiä tuloksia ja menetelmä voitiin ottaa käyttöön.

This study was done for the Red Cross Blood Service. The aim of this study was to set up and validate white blood cell compatibility test using Beckman Coulter’s Navios ™ flow cytometer. This method is used i.a. in post-transplant treatment, if the transferred kidney does not reach normal functioning levels, or is suspected of rejection. The test started with the calibration of Navios ™ flow cytometer: right settings were made and positive limits (T, B -IgG, and T -IgM) were defined. New T and B cell markers were selected that fluoresce clearly different wavelengths, thus avoiding the unwieldy test run adjustments. The method was validated after the setup. As test material, three (different) samples were used: peripheral blood cells, organ donor spleen cells stored in deep freeze, and kidney patients' frozen serum samples. Serums were selected so that there were negative, weakly positive, and strongly positive samples. Each series included negative and positive controls. These control results received methods RSD detail. The results received in validation indicated that sensitivity (sensitivity) and accuracy (specificity) were in line with the originally objectives. The results that were obtained with this method were similar to the results originally received when this method was first used, and therefore it indicates that the test/procedure/method could be implemented.