Magneettihelmiin ja vasta-aineisiin perustuvan näytteenkäsittelyn kehittäminen miniatyrisoiduille analyysilaitteille
Vähäkainu, Niina (2009)
Vähäkainu, Niina
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2009
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201001081128
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201001081128
Tiivistelmä
Tässä opinnäytetyössä kehitettiin magneettihelmiin ja vasta-aineisiin perustuvaa näytteenkäsittelymenetelmää miniatyrisoiduille analyysilaitteille. Työssä keskityttiin tutkimaan lämpöön reagoivia nanokokoisia magneettipartikkeleita (TMLA) erilaisissa näytematriiseissa.
Anti-foolihappovasta-ainefragmentti (Fab) tuotettiin E. coli RV308 -bakteerissa pienimuotoisena kahden litran kasvatuksena. Tuotettu vasta-aine puhdistettiin metalliaffiniteettikromatografisesti ja konjugoitiin biotiinin kanssa. Mallimolekyyli foolihappo konjugoitiin alkalinen fosfataasi -entsyymin kanssa.
Systeemin pystytyksessä etsittiin alkaliselle fosfataasille inhibiittori, NaH2PO4, vertailtiin anti-foolihappo- sekä anti-mykofenolihappovasta-aineita keskenään sekä TMLA- magneettihelmien määrän vaikutusta menetelmän toistettavuuteen. Päädyttiin jatkamaan kokeita anti-foolihappovasta-aineella ja käyttämään näytteissä 25 µl magneettihelmiä.
Foolihappo-alkalinen fosfataasi -konjugaatin tarttumista vasta-ainekonjugoituihin TMLA-magneettihelmiin tutkittiin puskurista, kliinisistä matriiseista; seerumista, syljestä ja virtsasta sekä nestemäisistä elintarvikematriiseista. Tutkittiin myös pH:n ja proteiinien vaikutusta tarttumiseen, määritettiin sitoutumisen saantoa ja vertailtiin lämpöön reagoivia magneettihelmiä perinteisiin magneettihelmiin. Havaittiin, että tätä systeemiä voidaan käyttää foolihappo-AP:n määrittämiseen seerumista, virtsasta, kahvista ja teestä. Myös neutraloidut omenamehu ja punaviini soveltuivat matriiseiksi. Syljen viskositeetti esti foolihappo-AP:n määrittämistä ja siinä toistettavuus oli heikkoa. Myös maitoproteiini, kaseiini, häiritsi termoresponsiivisia magneettisia nanopartikkeleita tässä systeemissä.
TMLA-helmiä testattiin myös näytteenkäsittelymenetelmänä kapillaarielektroforeesia varten sekä piisirulla.
Anti-foolihappovasta-ainefragmentti (Fab) tuotettiin E. coli RV308 -bakteerissa pienimuotoisena kahden litran kasvatuksena. Tuotettu vasta-aine puhdistettiin metalliaffiniteettikromatografisesti ja konjugoitiin biotiinin kanssa. Mallimolekyyli foolihappo konjugoitiin alkalinen fosfataasi -entsyymin kanssa.
Systeemin pystytyksessä etsittiin alkaliselle fosfataasille inhibiittori, NaH2PO4, vertailtiin anti-foolihappo- sekä anti-mykofenolihappovasta-aineita keskenään sekä TMLA- magneettihelmien määrän vaikutusta menetelmän toistettavuuteen. Päädyttiin jatkamaan kokeita anti-foolihappovasta-aineella ja käyttämään näytteissä 25 µl magneettihelmiä.
Foolihappo-alkalinen fosfataasi -konjugaatin tarttumista vasta-ainekonjugoituihin TMLA-magneettihelmiin tutkittiin puskurista, kliinisistä matriiseista; seerumista, syljestä ja virtsasta sekä nestemäisistä elintarvikematriiseista. Tutkittiin myös pH:n ja proteiinien vaikutusta tarttumiseen, määritettiin sitoutumisen saantoa ja vertailtiin lämpöön reagoivia magneettihelmiä perinteisiin magneettihelmiin. Havaittiin, että tätä systeemiä voidaan käyttää foolihappo-AP:n määrittämiseen seerumista, virtsasta, kahvista ja teestä. Myös neutraloidut omenamehu ja punaviini soveltuivat matriiseiksi. Syljen viskositeetti esti foolihappo-AP:n määrittämistä ja siinä toistettavuus oli heikkoa. Myös maitoproteiini, kaseiini, häiritsi termoresponsiivisia magneettisia nanopartikkeleita tässä systeemissä.
TMLA-helmiä testattiin myös näytteenkäsittelymenetelmänä kapillaarielektroforeesia varten sekä piisirulla.