Uuden Y-STR-PCR-menetelmän validointi

Abstract

Työ suoritettiin syksyllä 2013 Keskusrikospoliisin Rikosteknisessä laboratoriossa DNA-osastolla Vantaalla. Työn tavoitteena oli suorittaa uuden Y23 Y-STR-PCR -menetelmän käyttöönottoon vaadittavat mittaukset. Lisäksi työ sisälsi uudella Y-kvantitointimenetelmällä suoritettavan määritysrajojen selvittämisen Y-PCR -menetelmälle.

Työn näytteet koostuivat miehen DNA:sta valmistetuista laimennossarjoista, naisen ja miehen sekoitusnäytteistä sekä kahden miehen sekoitusnäytteistä. Lisäksi uusilla menetelmillä analysoitiin jo aiemmin heikkoja tai nollatuloksen antaneita rikospaikkanäytteitä. Opinnäytetyön ongelmat kohdattiin näytteen Y-DNA-pitoisuuden määrityksessä, jossa miehen DNA:ta mittaava kanava vääristi tuloksia. Ratkaisu löytyi konsultoimalla laitteen valmistajaaja, ongelma osattiin korjata tulosten analysointivaiheessa. Y23-menetelmän testimittauksien tavoitteina oli selvittää sen kyky monistaa heikkoja määriä miehen DNA:ta. Naisen ja miehen sekoitusnäytteissä pyrittiin selvittämään naisen inhiboivaa vaikutusta reaktioon. Kahden miehen sekoitusnäytteiden tavoitteena oli selvittää, että onko menetelmä kykenevä erottelemaan kahden henkilön tunnisteet.

Tulosten perusteella menetelmä on herkempi kuin käytössä oleva menetelmä ja nais- DNA:n vaikutusta reaktioiden toimivuuteen ei heikoimman miespitoisuuden sisältävissä näytteissä havaittu. Mies-DNA- sekoitusnäytteissä löydettiin 14 eroavaa aluetta, joiden perusteella voitiin todeta menetelmän monistavan molempia. Rikospaikkanäytteistä ei yhdestäkään saatu analysoitua täyttä tunnistetta, mutta tulokset osoittivat Y23-menetelmän olevan herkempi.

Opinnäytetyölle asetettuihin tavoitteisiin päästiin. Menetelmiä aletaan suorittamaan vanhojen kanssa rinnan, jotta voidaan varmistua niiden toiminnasta ja jotta saataisiin vertailtavaa dataa. Y23-menetelmän osalta täytyy vielä suorittaa populaatiotutkimus, jonka avulla voidaan kartoittaa maanlaajuisesti maan eri osien Y-kromosomaaliset genotyypit.

The thesis was conducted in autumn 2013 at the National Bureau of Investigation’s forensic laboratory, DNA laboratory. The aim of the study was to perform verifying measurements for the Promegas new Y23 Y-STR-PCR-method. In-addition, the study also included to perform measurements to discover limits of detection for the new Y-PCR’s by using new Y-quantification method.

Samples of the study consisted of dilutions made from man’s DNA, mixtures of female and male DNA and also a two-male mixtures. In-addition, new method was used for analyze of older, very weak crime scene samples. Problems were encountered in the quantitaion of the samples Y-DNA, in which a channel that measures man’s DNA distorted the results. The problem was solved by consulting the manufacturer of the device and analyse could be conducted as planned. The goals of the test measurements of the Y23-method were to ascertain its ability to replicate low amounts of male DNA. Mixtures of male and female were analyzed to determine the woman’s ability to inhibate the reaction. Samples that in-cluded DNA’s of two male were conducted to find out whether the method separate two different DNA profile.

The results of all samples show that method is more sensitive than the currently used method and woman’s presence in the reaction does not have almost any impact even in the lowest consentration male DNA containing samples. In the two-male samples there were 14 different areas that showed that the method is able to separate two different pro-files. In the crime scene samples were too weak to determine a full profile, but the results showed that the Y23 method is more sensitive.

The goals set for the thesis were reached. The new methods are going in use parallel wiht the old, in order to ensure their functionality and to obtain comparing data, asto the Y23 method is still necessary to perform a population study to identify nationally different Y chromosomal genotypes.