Vertailumenetelmän kehittäminen vasta-ainesensorille

Abstract

Opinnäytetyö tehtiin kesällä 2013 osana BioPrint-projektin #3-sensorimallin valmistusta. Työssä kehitettiin sandwich-ELISA-menetelmä antigeenin kvantitatiiviseen määrittämiseen käyttäen HRP-leimattua vasta-ainetta.

Painettujen sensorien avulla saadaan yksinkertaistettua ja nopeutettua esimerkiksi tarkkailua tai suurta otantaa vaativia testejä. Sensorit vaativat myös vähemmän näytettä, perinteiseen menetelmään verrattuna. Sensoreilla mitatessa testin suorittaja tarvitsee vähemmän koulutusta, kuin mitä vastaavan kliinisen testin suorittaminen vaatii. Sensorin kehityksestä saatavia tietoja voidaan tulevaisuudessa käyttää toisten vasta-ainesensorien kehitykseen. Vasta-ainesensoreilla puolestaan on todella suuri potentiaali terveydenhoidossa.

Työssä titrattiin sekä kaivoon sidotun, että leimana olevan vasta-aineen määrää testeissä. Työssä käytettiin valmiiksi monoklonaalisesti tuotettuja vasta-aineita, joita käytettään vastaavassa RIA-menetelmässä.

Menetelmää pyrittiin saamaan kliinisellä alueella lineaariseksi välillä 0–250 µg/l. Työtä hankaloitti vasta-aineiden ja antigeenin välisen affiniteetin suuruus, jonka seurauksena standardisuoran käytettävä lineaarisuusalue oli hyvin matalilla pitoisuuksilla, 0-640 ng/l.

Koska menetelmässä käytetyt vasta-aineet ja antigeeni ovat toimeksiantajan pyynnöstä luottamuksellisia, joten työssä keskitytään kuvaamaan sandwich-ELISAn kehitystä yleisellä tasolla sekä työssä esiintyneitä ongelmia.

The thesis was done at summer 2013 as a part of development BioPrint-projects #3 sensor model. A sandwich-ELISA assay was developed as a comparison for Quantitative measurement of antigen. Assay used HRP as a label.

Printed sensors simplify and speed up test that require long time surveillance or large sampling. Sensors usually require less samples material when compared to traditional assays. Using printed sensors is simpler than traditional test and so less training is required for assay. Knowledge gained from development of sensors can be used for future development of similar sensors. The antibody sensors have great potential at the future of healthcare.

This thesis addresses optimization of concentrations of both label and primary antibodies. The antibodies used in thesis have been produced monoclonal and are already used at similar RIA-assay.

Assay was intended to be linear at clinic range between 0–250 µg/L. However, the affinity of antigen and antibody proved to be too great and linear range was only between 0–640 ng/L.

For the used antibodies and antigen are confidential by the request of employer, thesis describes general development of sandwich-ELISA and the problems that occurred during the development.