Listerian kvalitatiivisen määritysmenetelmän kehittäminen
Granholm, Kristiina (2013)
Granholm, Kristiina
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2013
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013121020757
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013121020757
Tiivistelmä
Listeriaa tavataan maaperässä, vedessä ja eläimissä lähes kaikissa eläinlajeissa. Sitä tavataan myös oireettomilla, terveillä ihmisillä suolistossa. Listeria monocytogenes on patogeeninen sekä ihmisille että eläimille. Se voi aiheuttaa keskenmenoja raskaana oleville naisille sekä keuhkokuumetta vanhuksille ja pikkulapsille. Listeria on lyhyt gram-positiivinen sauva, katalaasipositiivinen ja oksidaasinegatiivinen.
Opinnäytetyö tehtiin Saarioinen Oy:lle. Työn tavoitteena oli ottaa käyttöön listeriabakteerien uusi LPT-tutkimusmenetelmä, jonka avulla saataisiin tulokset nopeammin ja vähemmällä työajalla kuin aikaisemmin. Menetelmän kehittäminen koostui erillisistä parametreistä, joilla tarkasteltiin menetelmän oikeellisuutta, määritysrajaa, spesifisyyttä sekä herkkyyttä. Menetelmän ulkoinen pätevyys on osoitettu osallistumalla SLV:n järjestämiin vertailukokeisiin.
Listerian toteamisessa LPT-menetelmällä käytettiin yksivaiheista rikastusta. Näytteet tutkittiin MiniVidas-immunoanalysaattorilla, joka on ELISA-pohjainen menetelmä ja perustuu immunofluoresenssiin. Positiivisiksi todetuista näytteistä tehtiin siirrostus ALOA-maljalle. Tyypillisistä pesäkkeistä tehtiin puhdasviljelmät naudan veriagarille ja tyypilliset pesäkkeet varmennetaan API Listeria -testillä ja tarvittaessa gram-värjäyksellä
Opinnäytetyössä suoritettiin kevyempi osittainen validointi, jonka tarkoituksena oli osoittaa menetelmän toimivuus. Menetelmä on jo kansainvälisissä tutkimuksissa validoitu ja stan-dardoitu. Validoinnin perusteella testattua Listerian tutkimismenetelmää voidaan pitää pätevänä osoittamaan Listeria spp -bakteerit erilaisista elintarvike- ja ympäristönäytteistä.
Opinnäytetyö tehtiin Saarioinen Oy:lle. Työn tavoitteena oli ottaa käyttöön listeriabakteerien uusi LPT-tutkimusmenetelmä, jonka avulla saataisiin tulokset nopeammin ja vähemmällä työajalla kuin aikaisemmin. Menetelmän kehittäminen koostui erillisistä parametreistä, joilla tarkasteltiin menetelmän oikeellisuutta, määritysrajaa, spesifisyyttä sekä herkkyyttä. Menetelmän ulkoinen pätevyys on osoitettu osallistumalla SLV:n järjestämiin vertailukokeisiin.
Listerian toteamisessa LPT-menetelmällä käytettiin yksivaiheista rikastusta. Näytteet tutkittiin MiniVidas-immunoanalysaattorilla, joka on ELISA-pohjainen menetelmä ja perustuu immunofluoresenssiin. Positiivisiksi todetuista näytteistä tehtiin siirrostus ALOA-maljalle. Tyypillisistä pesäkkeistä tehtiin puhdasviljelmät naudan veriagarille ja tyypilliset pesäkkeet varmennetaan API Listeria -testillä ja tarvittaessa gram-värjäyksellä
Opinnäytetyössä suoritettiin kevyempi osittainen validointi, jonka tarkoituksena oli osoittaa menetelmän toimivuus. Menetelmä on jo kansainvälisissä tutkimuksissa validoitu ja stan-dardoitu. Validoinnin perusteella testattua Listerian tutkimismenetelmää voidaan pitää pätevänä osoittamaan Listeria spp -bakteerit erilaisista elintarvike- ja ympäristönäytteistä.