Menetelmän kehitys ja validointi lääkeaineen määrittämiseen biologisesta matriisista
Manninen, Henna-Riikka (2022)
Manninen, Henna-Riikka
2022
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202203243944
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202203243944
Tiivistelmä
Opinnäytetyö tehtiin Terveyden ja hyvinvoinnin laitoksen oikeuskemian osastolle Helsingin toimipisteeseen. Työn tavoitteena oli kehittää kvantitatiivinen määritysmenetelmä enalaprilaatin pitoisuuksien määrittämiseen post mortem -verinäytteistä hyödyntämällä LC-MS/MS-massatekniikkaa. Opinnäytetyössä määritettiin lääkeaineelle optimaaliset massaspektrometriset olosuhteet, ja validoinnin perusteella selvitettiin
menetelmän toimivuus. Enalaprilaatti on aihiolääkkeenä annettavan enalapriilin aktiivinen lääkeaine, joka metaboloituu imeytymisen jälkeen maksassa entsymaattisesti. Menetelmän kehityksessä enalaprilaatille selvitettiin parametrit, joilla on mahdollista tuottaa korkein intensiteetti tutkittavalle lääkeaineelle. Samalla tarkasteltiin analyytin fragmentoitumista massa-analysaattorilla positiivisella ionisaatiolla. Menetelmän kehityksen jälkeen suoritettiin esivalidointi ja validointi menetelmän toimivuuden tarkasteluun. Validoinnin yhteydessä tarkasteltiin myös vanhoja vainajanäytteitä, joilla on saavutettu positiivinen tulos enalapriililla. Tulosten perusteella saatiin tietoa enalaprilaatin oikeista pitoisuuksista PM-verinäytteissä. Validointitulosten perusteella toteamisrajan pitoisuudeksi saatiin 0,0002 mg/l ja määritysrajan pitoisuudeksi 0,0005 mg/l. Suhteellinen poikkeama molemmilla pitoisuustasoilla jäi alle 6 %:n, ja toistettavuusnäytteiden suhteellinen keskihajonta jäi alle 20 %:iin Näytteiden matriisivaikutus on suhteellisen suuri, mutta se ei vaikuta analyysitulokseen merkitsevästi, koska suhteellinen poikkeama odotusarvosta jää alle 10 %:n. Laajennetuksi mittausepävarmuudeksi saatiin 21 %. Validointitulokset vastasivat odotuksia ja täyttivät validointisuunnitelmassa asetetut vaatimukset. Todelliset vainajanäytteet asettuivat hyvin kalibrointisuoralle, ja menetelmä toimii hyvin enalaprilaatin määrittämiseen. Enalaprilaatti pidättyy C-18-kolonnissa epätasaisesti, mikä näkyy piikin epäsymmetrisyytenä. Siitä huolimatta analyysituloksen toistettavuus säilyy. Enalaprilaatti ei aiheuta häiriösignaaleja muihin määritysmenetelmän analyyttien kromatogrammeihin, eivätkä muut analyytit häiritse enalaprilaatin määrittämistä merkitsevästi.
menetelmän toimivuus. Enalaprilaatti on aihiolääkkeenä annettavan enalapriilin aktiivinen lääkeaine, joka metaboloituu imeytymisen jälkeen maksassa entsymaattisesti. Menetelmän kehityksessä enalaprilaatille selvitettiin parametrit, joilla on mahdollista tuottaa korkein intensiteetti tutkittavalle lääkeaineelle. Samalla tarkasteltiin analyytin fragmentoitumista massa-analysaattorilla positiivisella ionisaatiolla. Menetelmän kehityksen jälkeen suoritettiin esivalidointi ja validointi menetelmän toimivuuden tarkasteluun. Validoinnin yhteydessä tarkasteltiin myös vanhoja vainajanäytteitä, joilla on saavutettu positiivinen tulos enalapriililla. Tulosten perusteella saatiin tietoa enalaprilaatin oikeista pitoisuuksista PM-verinäytteissä. Validointitulosten perusteella toteamisrajan pitoisuudeksi saatiin 0,0002 mg/l ja määritysrajan pitoisuudeksi 0,0005 mg/l. Suhteellinen poikkeama molemmilla pitoisuustasoilla jäi alle 6 %:n, ja toistettavuusnäytteiden suhteellinen keskihajonta jäi alle 20 %:iin Näytteiden matriisivaikutus on suhteellisen suuri, mutta se ei vaikuta analyysitulokseen merkitsevästi, koska suhteellinen poikkeama odotusarvosta jää alle 10 %:n. Laajennetuksi mittausepävarmuudeksi saatiin 21 %. Validointitulokset vastasivat odotuksia ja täyttivät validointisuunnitelmassa asetetut vaatimukset. Todelliset vainajanäytteet asettuivat hyvin kalibrointisuoralle, ja menetelmä toimii hyvin enalaprilaatin määrittämiseen. Enalaprilaatti pidättyy C-18-kolonnissa epätasaisesti, mikä näkyy piikin epäsymmetrisyytenä. Siitä huolimatta analyysituloksen toistettavuus säilyy. Enalaprilaatti ei aiheuta häiriösignaaleja muihin määritysmenetelmän analyyttien kromatogrammeihin, eivätkä muut analyytit häiritse enalaprilaatin määrittämistä merkitsevästi.