Menetelmän kehitys ja validointi dopingaineiden tutkimiseen kuivaverinäytepisaroista
Siivonen, Alisa (2023)
2023
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2023092926587
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2023092926587
Tiivistelmä
Opinnäytetyö tehtiin terveyden ja hyvinvoinninlaitoksen oikeuskemiayksikön dopingtestauslaboratoriolle. Työn tarkoitus oli kehittää ja validoida menetelmä useiden erilaisten dopingaineiden tutkimiseen kuivaverinäytepisaroista. Menetelmä on kvalitatiivinen seulontamenetelmä, jonka tarkoitus on kartoittaa mahdollisesti dopingaineita sisältävät näytteet tarkempia jatkotutkimuksia varten. Menetelmässä kuivaverinäytteet esikäsitellään nesteuutolla ja analysoidaan nestekromatografi-tandemmassaspektrometrilla.
Kuivatut verinäytepisarat ovat uusi näytematriisi dopingtestauslaboratoriolle, jossa dopingaineita tutkitaan perinteisesti virtsasta ja putkiin otettavista laskimoverinäytteistä. Kuivattujen verinäytepisaroiden käytöllä on monia varastointiin, kuljetukseen sekä näytteenoton kivuttomuuteen ja helppouteen liittyviä etuja laskimoverinäytteisiin nähden.
Näytteiden esikäsittelymenetelmän kehitys aloitettiin testaamalla erilaisten uuttoliuosten toimivuutta. Kokeiltiin myös näytteiden uuttamista ultraäänihauteessa sekä ravistelulaitteessa. Selvitettiin uutolle tehokkain aika ja kokeiltiin haihdutusjäännöksen liuottamista eri tilavuuksiin ajoliuosseosta. Tämän lisäksi joidenkin tutkittavien dopingaineiden havaittavuutta pyrittiin parantamaan optimoimalla massa-analysaattorin asetuksia. Kun toimiva menetelmä oli saatu kehitettyä, se validoitiin. Validoinnin parametrit olivat: toteamisraja, toistettavuus, selektiivisyys, spesifisyys, yhdisteiden säilyvyys, siirtymävirhe ja saanto.
Onnistuttiin kehittämään menetelmä, jolla havaitaan tutkittavat dopingaineet kuivaverinäytteistä. Kehitetyn menetelmän soveltuvuus käyttötarkoitukseensa todennettiin validoinnilla. Näytteiden esikäsittely päädyttiin tekemään uuttamalla kuivaverinäytteet 15 minuutin ajan ultraäänihauteessa metanolisessa uuttoliuoksessa. Haihdutusjäännöksen liuotustilavuudeksi valittiin 70 µl:aa ajoliuosseosta. Yhdisteiden havaittavuutta ei kyetty parantamaan massa-analysaattorin asetuksia muuttamalla. Validoinnin tavoitteet saavutettiin kaikkien yhdisteiden osalta lukuun ottamatta oksandrolonia, joka päädyttiin poistamaan menetelmästä.
Kuivatut verinäytepisarat ovat uusi näytematriisi dopingtestauslaboratoriolle, jossa dopingaineita tutkitaan perinteisesti virtsasta ja putkiin otettavista laskimoverinäytteistä. Kuivattujen verinäytepisaroiden käytöllä on monia varastointiin, kuljetukseen sekä näytteenoton kivuttomuuteen ja helppouteen liittyviä etuja laskimoverinäytteisiin nähden.
Näytteiden esikäsittelymenetelmän kehitys aloitettiin testaamalla erilaisten uuttoliuosten toimivuutta. Kokeiltiin myös näytteiden uuttamista ultraäänihauteessa sekä ravistelulaitteessa. Selvitettiin uutolle tehokkain aika ja kokeiltiin haihdutusjäännöksen liuottamista eri tilavuuksiin ajoliuosseosta. Tämän lisäksi joidenkin tutkittavien dopingaineiden havaittavuutta pyrittiin parantamaan optimoimalla massa-analysaattorin asetuksia. Kun toimiva menetelmä oli saatu kehitettyä, se validoitiin. Validoinnin parametrit olivat: toteamisraja, toistettavuus, selektiivisyys, spesifisyys, yhdisteiden säilyvyys, siirtymävirhe ja saanto.
Onnistuttiin kehittämään menetelmä, jolla havaitaan tutkittavat dopingaineet kuivaverinäytteistä. Kehitetyn menetelmän soveltuvuus käyttötarkoitukseensa todennettiin validoinnilla. Näytteiden esikäsittely päädyttiin tekemään uuttamalla kuivaverinäytteet 15 minuutin ajan ultraäänihauteessa metanolisessa uuttoliuoksessa. Haihdutusjäännöksen liuotustilavuudeksi valittiin 70 µl:aa ajoliuosseosta. Yhdisteiden havaittavuutta ei kyetty parantamaan massa-analysaattorin asetuksia muuttamalla. Validoinnin tavoitteet saavutettiin kaikkien yhdisteiden osalta lukuun ottamatta oksandrolonia, joka päädyttiin poistamaan menetelmästä.