Pleura- ja askitesnesteiden sytosentrifugivalmisteen laimennusohje

Abstract

Opinnäytetyön tavoitteena oli mahdollistaa sytosentrifugitekniikan käyttöönotto hematologian laboratoriossa pleura- ja askitesnesteiden diagnostiikassa. Olemme dokumentoineet tähän opinnäytetyöhön taustatietoa, jota tarvitsimme ennen työhön ryhtymistä, sekä työnkulun valmiisiin preparaatteihin ja ohjeen valmistumiseen.

Pleura- ja askitesnesteistä valmistetaan preparaatteja leukosyyttien mikroskooppista erittelylaskentaa varten. Opinnäytetyön tarkoituksena oli selvittää eri solumäärille sopivat laimennokset pleura- ja askitesnesteestä tehtävää sytosentrifugivalmistetta varten. Sopivat laimennokset selvitettiin kokeellisella tutkimuksella, jonka tulosten pohjalta tehtiin laimennusohje hematologian laboratorion käyttöön. Laimentamisohje on tarpeen johtuen monien näytteiden korkeasta solupitoisuudesta, joka vaikeuttaa leukosyyttien erottamista ja niiden laskemista.

Tutkimusmateriaalina käytettiin alle 24 tuntia vanhoja pleura- ja askitesneste-näytteitä, joista oli tiedossa näytteiden solumäärä. Näytteistä valmistettiin suunnitellusti 24 erilaista laimennusta Shandon Cytospin 4 -sytosentrifugilla. Opinnäytetyö tehtiin yhteistyössä Fimlab Laboratoriot Oy:n hematologian laboratorion kanssa.

Valmiit preparaatit mikroskopoitiin tarkemmin Tampereen ammattikorkeakoulun tiloissa. Preparaateista arvioitiin solujen päällekkäisyyttä, jakautumista, hajonneiden solujen määrää, solujen värjäytymistä ja solujen tunnistettavuutta arviointiasteikolla 1–5. Vertailemalla ja arvioimalla preparaattien onnistumista löydettiin sopivimmat laimennokset toimivaa laimennusohjetta varten.

The aim of the thesis was to enable the introduction of cytocentrifuge technology in the hematology laboratory for the diagnosis of pleural and ascites fluids. For this thesis, the needed background information was documented before starting the work, as well as the workflow for the finished preparations and the completion of the instructions.

Preparations are made from pleural and ascites fluids for microscopic counting of leukocytes. The purpose of the thesis was to find out the dilutions suitable for different cell numbers for the cytocentrifuge preparation made from pleural and ascites fluid. The suitable dilutions were determined by an experimental study and based on the results the dilution guideline was made. The dilution instruction is necessary due to the high cell concentration of many samples, which makes it difficult to separate leukocytes and count them.

For the research material pleural and ascitic fluid samples less than 24 hours old were used. The cell count of those samples was known. A total of 24 different dilutions were prepared from the samples using a Shandon Cytospin 4 cytocentrifuge. The sample work was done in co-operation with the hematology laboratory of Fimlab Laboratoriot Oy.

The finished preparations were examined under a microscope in more detail in the premises of the Tampere University of Applied Sciences. The preparations were evaluated for overlapping of cells, distribution, number of broken cells, staining of cells and recognizability of cells on a rating scale of 1–5. By comparing and evaluating the success of the preparations, we found the most suitable dilutions for a working dilution instruction.