Haimaperäisen amylaasin verifiointi Cobas c503 analysaattorille
Nuora, Nico (2023)
2023
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2023113033115
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2023113033115
Tiivistelmä
Amylaasi on ruuansulatusentsyymi, josta esiintyy verenkierrossa kaksi isoentsyymiä. Haimaperäisen amylaasientsyymin lisäksi verenkierrossa esiintyy sylkirauhasperäistä amylaasin isoentsyymiä. Haimaperäinen amylaasi on tyypillisesti koholla akuutin pankreatiitin (haimatulehduksen) yhteydessä. Sylkirauhasperäisen amylaasin pitoisuus ei ole riippuvainen haiman toimintakyvystä. Akuutin pankreatiitin diagnostiikassa on aiemmin käytetty amylaasin kokonaistason määritystä, joka ei erittele isoentsyymien pitoisuuksia. Akuutin pankreatiitin diagnosointi on kokonaistason määrityksen perusteella hankalampaa, koska viitearvon ylitys voi johtua vain sylkirauhasperäisen amylaasin pitoisuuden kohoamisesta.
Haimaperäisen amylaasin tutkimusmenetelmässä sylkirauhasperäisen amylaasin häiritsevä vaikutus poistetaan inhiboimalla se kahdella vasta-aineella jotka sitoutuvat vain sylkirauhasperäiseen amylaasiin. Immunoinhibition jälkeen alkaa kaksivaiheinen entsyymi-substraatti reaktio, jonka lopputuotteena saadaan p-nitrofenolia. p-nitrofenolin muodostumistahti on suoraan verrannollinen haimaperäisen amylaasin pitoisuuteen näytteessä. Haimaperäisen amylaasin pitoisuus näytteessä voidaan päätellä kun p-nitrofenolin pitoisuus on mitattu fotometrisesti.
Opinnäytetyö tehtiin toimeksiantona Vita Laboratoriot Oy:lle. Verifiointi suoritettiin kahdelle Rochen Cobas c503 analysaattorille, laite 2 toimii poikkeustilanteessa tutkimuksen varalaitteena. Verifointiin sisältyi menetelmän toistettavuuden ja systemaattisen mittavirheen (bias) arvion määritys. Referenssilaitteena käytettiin Rochen Cobas c701 analysaattoria. Data analysoitiin Finbiosoftin Validation Manager - ohjelmalla.
Tulosten tarkastelussa havaittiin että systemaattinen mittavirhe on liian suuri matalalla pitoisuusalueella. Tutkimuksen ensisijaisella analysaattorilla bias on tavoiterajoissa 15,8 U/L pitoisuudesta alkaen, varalaitteella bias on tavoiterajoissa 12 U/L pitoisuudesta alkaen. Alin viitearvo haimaperäiselle amylaasille on <20 U/L, tätä pienempiä tuloksia ei ilmoiteta tarkemmin. Näin ollen systemaattisen mittavirheen tavoitteen täyttyminen edellä mainituilla pitoisuuksilla on koettu riittäväksi. Toistettavuudelle asetetut tavoitteet täyttyivät molemmilla laitteilla.
Haimaperäisen amylaasin tutkimusmenetelmässä sylkirauhasperäisen amylaasin häiritsevä vaikutus poistetaan inhiboimalla se kahdella vasta-aineella jotka sitoutuvat vain sylkirauhasperäiseen amylaasiin. Immunoinhibition jälkeen alkaa kaksivaiheinen entsyymi-substraatti reaktio, jonka lopputuotteena saadaan p-nitrofenolia. p-nitrofenolin muodostumistahti on suoraan verrannollinen haimaperäisen amylaasin pitoisuuteen näytteessä. Haimaperäisen amylaasin pitoisuus näytteessä voidaan päätellä kun p-nitrofenolin pitoisuus on mitattu fotometrisesti.
Opinnäytetyö tehtiin toimeksiantona Vita Laboratoriot Oy:lle. Verifiointi suoritettiin kahdelle Rochen Cobas c503 analysaattorille, laite 2 toimii poikkeustilanteessa tutkimuksen varalaitteena. Verifointiin sisältyi menetelmän toistettavuuden ja systemaattisen mittavirheen (bias) arvion määritys. Referenssilaitteena käytettiin Rochen Cobas c701 analysaattoria. Data analysoitiin Finbiosoftin Validation Manager - ohjelmalla.
Tulosten tarkastelussa havaittiin että systemaattinen mittavirhe on liian suuri matalalla pitoisuusalueella. Tutkimuksen ensisijaisella analysaattorilla bias on tavoiterajoissa 15,8 U/L pitoisuudesta alkaen, varalaitteella bias on tavoiterajoissa 12 U/L pitoisuudesta alkaen. Alin viitearvo haimaperäiselle amylaasille on <20 U/L, tätä pienempiä tuloksia ei ilmoiteta tarkemmin. Näin ollen systemaattisen mittavirheen tavoitteen täyttyminen edellä mainituilla pitoisuuksilla on koettu riittäväksi. Toistettavuudelle asetetut tavoitteet täyttyivät molemmilla laitteilla.