Uusien endogeenisten referenssiyhdisteiden validointi GC-C-IRMS-menetelmään

Abstract

Doping on määritelty kilpaurheilussa sellaiseksi toiminnaksi, joka parantaa suorituskykyä antidopingsäännöstöjen vastaisilla tavoilla. Testosteronin ja muiden anabolisten steroidien käyttäminen kilpasuorituksen tehostamiseksi on Maailman antidopingjärjestö WADAn määräyksestä kiellettyä kaikkina aikoina, ja määräyksen laiminlyönnistä seuraa urheilijan välitön diskvalifiointi sekä mahdollisesti jopa kilpailukieltoa. Testosteronia esiintyy luontaisesti ihmisen kehossa. Sen synteettisen vastikkeen nauttimisen todistamiseksi on käytettävä isotooppisuhdemassaspektrometristä (IRMS) menetelmää, joka kykenee isotooppitasolla havaitsemaan yhdisteiden eroavaisuuksia.

Opinnäytetyö tehtiin THL:n dopingtestauslaboratoriossa. Opinnäytetyön aiheena oli lisätä ja validoida olemassa olevaan IRMS-menetelmään kaksi uutta endogeenistä referenssiyhdistettä, 5a-androst-16-en-3a-ol (16-EN) sekä pregnanetrioli (PT). Validointi suoritettiin soveltaen voimassa olevaa omaa validointiohjetta, WADAn ohjeistusta ja WADAn ohjeissa määritettyjä laatutavoitteita. IRMS-menetelmässä virtsanäyte käy läpi esikäsittelyn, johon kuuluu kiinteäfaasiuutto, entsymaattinen hydrolyysi, nesteuutto sekä fraktiointi nestekromatografisesti. Isotooppisuhdemittaus vaatii näytteen tarkan puhdistamisen ja yhdisteiden erottelun, sillä endogeenisiä referenssiyhdisteitä ja kohdeyhdisteitä täytyy pystyä mittaamaan yksitellen. Synteettisten steroidien käyttö vahvistetaan, jos näytteessä olevan testosteronin tai muun kohdeyhdisteen delta 13 C-arvo poikkeaa riittävästi endogeenisistä referenssiyhdisteistä.

Opinnäytetyön ansiosta ollaan lähempänä uusien yhdisteiden validoimista menetelmään. Aikataulusyistä täydellistä validointia ei onnistuttu tekemään, mutta saatujen tulosten perusteella pregnanetrioli ja 16-EN ovat sopivia yhdisteitä IRMS-menetelmään.