Lyyttisten polysakkaridimono-oksigenaasientsyymien tuotto ja karakterisointi
Anttonen, Aino (2024)
2024
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202405069600
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202405069600
Tiivistelmä
Insinöörityö tehtiin Teknologian tutkimuskeskus VTT:lle. Työssä tuotettiin ja karakterisointiin lyyttisiä polysakkaridimono-oksigenaasientsyymejä (LPMO). Entsyymien tuotossa tuottoisäntänä toimi Trichoderma reesei -sieni. Tuotto suoritettiin kahdessa erässä eri kasvatusajoilla. Näin työn tuloksiin saatiin entsyymien ja erien välistä vertailua.
Lyyttiset polysakkaridimono-oksigenaasientsyymit ovat entsyymejä, jotka edistävät lignoselluloosan entsymaattista hajotusta luonnossa. Tämä perustuu näiden entsyymeiden kykyyn hajottaa polysakkarideja katalysoimalla polysakkaridien hapetusreaktiota.
Työn tavoitteena oli vertailla 20:n eri lyyttisen polysakkaridimono-oksigenaasientsyymin tuotettavuutta Trichoderma reeseissä. Tuotettavuutta mitattiin entsyymien proteiinikoostumusta analysoimalla. Työn toinen tavoite oli tutkia tuotettujen entsyymien aktiivisuutta ja valikoida katalyyttisesti aktiivisimmat ”yksilöt” jatkotutkimuksia varten.
Tutkimuksessa saadut tulokset olivat selkeästi vertailuarvoja matalammat kaikkien kokeiden kohdalla. Tuottoprosessissa visuaalisesti nähtiin kasvustoa kaikkien näytteiden kohdalla. Proteiini analyysissä kuitenkin huomattiin, että proteiineista vain 14 ilmeni elektroforeesigeelillä. Tämä peilautui myös aktiivisuusmittauksiin, joiden tulokset olivat alhaiset verrattaessa vertailuarvoihin. Merkittävää aktiivisuutta havaittiin vain yhdellä entsyymillä. Näiden tulosten perusteella tutkitut entsyymit voisivat toisenlaisissa olosuhteissa, ja niille spesifimmin muokattujen menetelmien avulla tuottaa parempia tuloksia.
Lyyttiset polysakkaridimono-oksigenaasientsyymit ovat entsyymejä, jotka edistävät lignoselluloosan entsymaattista hajotusta luonnossa. Tämä perustuu näiden entsyymeiden kykyyn hajottaa polysakkarideja katalysoimalla polysakkaridien hapetusreaktiota.
Työn tavoitteena oli vertailla 20:n eri lyyttisen polysakkaridimono-oksigenaasientsyymin tuotettavuutta Trichoderma reeseissä. Tuotettavuutta mitattiin entsyymien proteiinikoostumusta analysoimalla. Työn toinen tavoite oli tutkia tuotettujen entsyymien aktiivisuutta ja valikoida katalyyttisesti aktiivisimmat ”yksilöt” jatkotutkimuksia varten.
Tutkimuksessa saadut tulokset olivat selkeästi vertailuarvoja matalammat kaikkien kokeiden kohdalla. Tuottoprosessissa visuaalisesti nähtiin kasvustoa kaikkien näytteiden kohdalla. Proteiini analyysissä kuitenkin huomattiin, että proteiineista vain 14 ilmeni elektroforeesigeelillä. Tämä peilautui myös aktiivisuusmittauksiin, joiden tulokset olivat alhaiset verrattaessa vertailuarvoihin. Merkittävää aktiivisuutta havaittiin vain yhdellä entsyymillä. Näiden tulosten perusteella tutkitut entsyymit voisivat toisenlaisissa olosuhteissa, ja niille spesifimmin muokattujen menetelmien avulla tuottaa parempia tuloksia.