Kvantitatiivisen mikrobiologisen menetelmän verifiointi

Abstract

Opinnäytetyön tavoitteena oli luoda menettelyohje kvantitatiivisen mikrobiologisen menetelmän verifiointia varten Metropolia Ammattikorkeakoulun käyttöön. Menettelyohjeesta haluttiin selkeä ja työmäärältään maltillinen ja kaikki verifiointia varten tarvittava tulosten käsittely haluttiin esittää ohjeessa selkeillä esimerkeillä. Menettelyohje luotiin Metropolian menettelyohjepohjaan ja sen perustana käytettiin standardia SFS-EN ISO 13843:2017, ” Water quality - Requirements for establishing performance characteristics of quantitative microbiological methods” sekä VTT:n ”Validoinnin suunnittelun opas” -kirjaa. Menettelyohjeen verifiointiparametreiksi valittiin toistettavuus ja lukemaepävarmuus sekä esitettiin valinnaisia parametrejä verifioinnin tueksi.

Menettelyohjetta testattiin käytännössä verifioimalla menetelmä ”Veden heterotrofisen pesäkeluvun määritys juomavedestä petrifilmimenetelmällä”. Kyseistä menetelmää käytetään laboratorioanalytiikan vesianalyysiprojektikurssilla ja sillä arvioidaan juomavesien kokonaismikrobien sekä ihmis- ja eläinperäisten mikrobien määrää. Menetelmällä saadaan suuntaa antavia tuloksia veden puhtaudesta.

Verifiointi onnistui menettelyohjeen mukaisesti kokonaismikrobien osalta, jossa menetelmän toistettavuus oli 4,0 % ja lukemaepävarmuus 4,6 %. Ihmis- ja eläinperäisten bakteerien määrityksessä toistettavuus oli 8,3 %, lukemaepävarmuutta ei pystytty määrittämään liian alhaisten pesäkemäärien takia ja verifiointi näiltä osin hylättiin. Toistettavuuden hyväksymisraja oli 7,6 % ja lukemaepävarmuuden hyväksymisraja 10 %.

Verifioinnin perusteella menettelyohje täytti sille asetetut tavoitteet ja menettelyohjetta voidaan jatkossa käyttää avuksi kvantitatiivisten mikrobiologisten menetelmien verifiointiin Metropolia Ammattikorkeakoulussa.

Objective of the thesis work was to create a procedure instruction for method verification of quantitative microbiological methods for the use of Metropolia University of applied sciences. Requirements for the instructions were ease of use, manageable workload and clear examples of calculations involved in verification. Verification parameters were based on standard SFS-EN ISO 13843:2017, “Water quality - Requirements for establishing performance characteristics of quantitative microbiological methods” and general guidelines on book ”Validoinnin suunnittelun opas” from VTT. Verification parameters chosen were repeatability and uncertainty of counting. Optional parameters were quantities involved in colony identification and method comparison.

Procedure instruction was tested by verifying 3M™ Petrifilm™ Aqua Plate Method. The method is used for estimation of heterotrophic plate count in drinking waters. It involves incubation in two different temperatures, offering estimation of total count for heterotrophic microorganisms, as well as estimation of bacteria of human and animal origin.

Acceptance limit for repeatability of Aqua Plate Method was 7.6 %. Repeatability for heterotrophic microbes achieved in verification was 4.0 % and for bacteria of human and animal origin 8.3 %. Ideal uncertainty of counting is considered 2.5 % and acceptance limit for the verification was 10 %. Uncertainty of counting for heterotrophic microbes achieved in verification was 4.6 % and could not be determined for bacteria of human and animal origin because of too low bacterial growth in samples used. Verification of heterotrophic microbes using 3M™ Petrifilm™ Aqua Plate Method was accepted in accordance with procedure instructions and verification of bacteria of human and animal origin was rejected.