MSRV-rikastusalustan laadunvarmistusmenetelmän kehittäminen
Silvennoinen, Vilma (2024)
2024
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2024102426777
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2024102426777
Tiivistelmä
Salmonella on yksi merkittävimmistä zoonooseista, joka voi tarttua eläimestä ihmiseen ja päinvastoin. Eläintautilaissa salmonella on luokiteltu muuksi ilmoitettavaksi eläintaudiksi, ja salmonellatartuntoja seurataan myös lemmikkieläimillä. Salmonella diagnosoidaan lemmikeillä ulostenäytteestä tehdyllä bakteeriviljelyllä, ja positiivisista tuloksista laboratoriolla on ilmoitusvelvollisuus viranomaisille.
Opinnäytetyö toteutettiin yhteistyössä Yliopistollisen eläinsairaalan kliinisen mikrobiologian laboratorion (YESLAB) kanssa. YESLAB tutkii seura- ja harrastuseläinten bakteriologisia näytteitä mukaan lukien salmonellan esiintyvyyttä ulostenäytteestä tehdyllä bakteeriviljelyllä. Viljelyssä käytetään puolikiinteää MSRV-rikastusalustaa, joka valmistetaan itse kaupallisista reagensseista. Valmistuksen yhteydessä rikastusalustalle tehdään sisäinen laadunvarmistus, jonka tarkoituksena on varmistaa maljaerän toimivuus positiivisella kontrollinäytteellä ja negatiivisilla kontrollikannoilla.
Työssä päivitettiin laadunvarmistusmenetelmän positiivinen kontrollikanta Salmonella Abony -kannasta Salmonella Tranaroa -kantaan sekä vaihdettiin kontrollisuspensio ulostenäytteestä SkimMilk-liuokseen. Työn suoritus aloitettiin positiivisen kontrollisuspension valmistuksella, joka sisälsi sopivan salmonellapitoisuuden määrityksen pakastettavassa suspensiossa. Salmonellapitoisuuden tulos todettiin riittäväksi, vaikka tulos ei täysin asettunut tavoitteeseen.
Laadunvarmistuksessa esirikastettu positiivinen kontrollinäyte ja negatiiviset kontrollikannat siirrostettiin MSRV-rikastusalustalle. Tuloksia tarkasteltiin maljaviljelyn perusteella, jossa arvioitiin kasvuston määrää, ulkonäköä, kokoa ja pesäkkeiden morfologisia ominaisuuksia. Tuloksissa positiiviset maljaviljelyt kasvoivat tyypillisesti, kun taas negatiiviset ja steriilisyys kontrollimaljat eivät kasvaneet lainkaan. Tulosten perusteella voitiin todeta, että päivitetty salmonellaserotyyppi sekä bakteerisuspensiotyyppi soveltuivat positiiviseksi kontrollinäytteeksi laadunvarmistuksessa. Saatujen tulosten perusteella viimeisteltiin MSRV-rikastusalustan valmistus ja laadunvarmistustyöohje.
Opinnäytetyö toteutettiin yhteistyössä Yliopistollisen eläinsairaalan kliinisen mikrobiologian laboratorion (YESLAB) kanssa. YESLAB tutkii seura- ja harrastuseläinten bakteriologisia näytteitä mukaan lukien salmonellan esiintyvyyttä ulostenäytteestä tehdyllä bakteeriviljelyllä. Viljelyssä käytetään puolikiinteää MSRV-rikastusalustaa, joka valmistetaan itse kaupallisista reagensseista. Valmistuksen yhteydessä rikastusalustalle tehdään sisäinen laadunvarmistus, jonka tarkoituksena on varmistaa maljaerän toimivuus positiivisella kontrollinäytteellä ja negatiivisilla kontrollikannoilla.
Työssä päivitettiin laadunvarmistusmenetelmän positiivinen kontrollikanta Salmonella Abony -kannasta Salmonella Tranaroa -kantaan sekä vaihdettiin kontrollisuspensio ulostenäytteestä SkimMilk-liuokseen. Työn suoritus aloitettiin positiivisen kontrollisuspension valmistuksella, joka sisälsi sopivan salmonellapitoisuuden määrityksen pakastettavassa suspensiossa. Salmonellapitoisuuden tulos todettiin riittäväksi, vaikka tulos ei täysin asettunut tavoitteeseen.
Laadunvarmistuksessa esirikastettu positiivinen kontrollinäyte ja negatiiviset kontrollikannat siirrostettiin MSRV-rikastusalustalle. Tuloksia tarkasteltiin maljaviljelyn perusteella, jossa arvioitiin kasvuston määrää, ulkonäköä, kokoa ja pesäkkeiden morfologisia ominaisuuksia. Tuloksissa positiiviset maljaviljelyt kasvoivat tyypillisesti, kun taas negatiiviset ja steriilisyys kontrollimaljat eivät kasvaneet lainkaan. Tulosten perusteella voitiin todeta, että päivitetty salmonellaserotyyppi sekä bakteerisuspensiotyyppi soveltuivat positiiviseksi kontrollinäytteeksi laadunvarmistuksessa. Saatujen tulosten perusteella viimeisteltiin MSRV-rikastusalustan valmistus ja laadunvarmistustyöohje.