Elektrolyyttien määritys vainajien lasiaisnäytteistä ja menetelmän validointi verikaasuanalysaattorille

Abstract

Tämä opinnäytetyö tehtiin Terveyden ja hyvinvoinnin laitokselle (THL). Työn tarkoituksena oli selvittää ABL90 FLEX PLUS -verikaasuanalysaattorin soveltuvuutta elektrolyyttien määrittämiselle vainajien lasiaisnäytteistä. Tavoitteena oli kehittää ja validoida menetelmä kaliumin, kalsiumin, kloridin ja natriumin määrittämistä varten.

Menetelmän kehitysosuudessa säilöntäaineellisia ja käsittelemättömiä lasiaisnäytteitä vertailtiin toisiinsa laimennostestauksella laimentamisen sekä matriisierojen vaikutuksien selvittämiseksi. Tulosten perusteella havainnoitiin laitteiston soveltuvuus elektrolyyttien määrittämiselle. Saatujen tulosten ja kirjallisuuskatsauksen myötä näytteille kehitettiin esikäsittelymenetelmä, jota sovellettiin validointiosuuden mittauksissa.

Menetelmän validoinnissa määritettävinä käsitteinä ja näiden tavoitteina olivat oikeellisuus (< 20 %), sisäinen ja välitason toistotarkkuus (< 15 %), laajennettu mittausepävarmuus (< 30 %) sekä stabiilius. Oikeellisuuden arviointi toteutettiin laboratoriovertailuna Synlabin ja THL:n laboratorioiden välillä. Toistotarkkuuksien määrittämisessä arvioitiin tuloshajontoja rinnakkaismäärityksien välisessä toistettavuudes-sa sekä päivien välisessä uusittavuudessa. Stabiiliusosuudessa selvitettiin esikäsittelyn vaikutusta näytteiden säilyvyyksiin sekä ajan vaikutusta näytteiden elektrolyyttipitoisuuksiin. Lisäksi laskettiin mittausepävarmuudet elektrolyyteille MUkit-ohjelmalla.

Työn tuloksena saatiin kehitettyä menetelmä, jolla kyetään määrittämään tutkittavia elektrolyyttejä säilöntäaineettomasta lasiaisesta. Validointitulosten kannalta kalsiumin määrittäminen ei yllä validointisuunnitelman tavoitteisiin mittausepävarmuuden (62 %) ja oikeellisuuden (23 %) suhteen. Tämä ei kuitenkaan estä menetelmän käyttöönottoa.

This bachelor’s thesis work was conducted for The Finnish Institute for Health and Welfare (THL). The focus of the thesis was method development and validation for analysis of electrolytes from post-mortem vitreous humor for ABL 90 FLEX PLUS -blood gas analyzer. The electrolytes in focus were potassium, calcium, chloride and sodium.

For method development, samples of vitreous humor with and without sodium fluoride were tested through a series of dilutions to identify the effects of sample dilution and changes in sample matrix. Given the results, it was determined that the analyzer could perform analysis of electrolytes and, according to the results, an appropriate pretreatment method was developed and applied in the following validation portion of the thesis.

The parameters and set criteria for the validation of the method were trueness (<20 %), repeatability (<15 %), reproducibility (<15 %), extended measurement uncertainty (<30 %) and stability. The trueness was determined with an interlaboratory comparison between Synlab and THL. The repeatability and reproducibility were evaluated by analysis of both daily and between-day measurement deviations. The stability portion included evaluating effects of method pretreatment on samples as well as the effects of time on the electrolyte concentrations within samples. Additionally, measurement uncertainties for electrolytes were calculated using MUkit program.

As a result of thesis, a suitable method was developed for the analysis of electrolytes in untreated vitreous humor. According to the validation results, the determination of calcium does not fit into the set validation criteria for measurement uncertainty (62 %) and trueness (23 %). However, this does not prevent the implementation of the method for purposes of forensic analysis.