Raskaudenaikaisen anti-G-vasta-aineen (Rh) erottaminen anti-DC-vasta-aineyhdistelmästä (Rh) absorptioeluaatiomenetelmällä

Abstract

Sikiö perii veriryhmätekijät molemmilta vanhemmiltaan. Äidin ja sikiön veriryhmätekijöiden poiketessa toisistaan voi äidin immuunijärjestelmä aktivoitua tuottamaan vasta-aineita sikiön isältään perimiä punasolujen pintarakenteita kohtaan. Suurimman osan raskaudenaikaisista immunisaatioista aiheuttaa Rh-vasta-aine anti-D. Se on tärkein vastasyntyneen hemolyyttistä tautia aiheuttava punasoluvasta-aine ja suurimmassa immunisaatioriskissä ovat ne RhD-negatiiviset äidit, jotka synnyttävät RhD-positiivisen lapsen. Koska G-antigeenin tiedetään olevan harvoja poikkeuksia lukuun ottamatta läsnä lähes kaikissa D- ja C-antigeenin suhteen positiivisissa punasoluissa, on sitä vastaan muodostuvan anti-G-vasta-aineen todettu häiritsevän RhD-negatiivisten äitien vasta-ainetunnistuksia.

Opinnäytetyön empiirinen osuus toteutettiin Suomen Punaisen Ristin Veripalvelussa, Veriryhmätutkimusten laboratoriossa. Työtä varten oli kerätty potilas- ja neuvolanäytteitä, joista anti-G-vasta-aine erotettiin alloabsorptiomenetelmää käyttäen. Happoeluaatiolla punasolun pintaan kiinnittyneet punasoluvasta-aineet irrotettiin happamaan puskuriin, josta ne osoitettiin vasta-ainetunnistuksella. Vasta-aineet tunnistettiin ID-geelitekniikkaa käyttäen ja vasta-ainepitoisuudet määritettiin titraamalla. Kontrollisolut oli käsitelty papaiinilla.

Tavoitteena oli ottaa käyttöön menetelmä, jolla anti-G-vasta-aine voidaan luotettavasti erottaa anti-DC-vasta-aineyhdistelmästä. Oli myös tarpeen selvittää kriteerit, jotka herättivät epäilyn anti-G-vasta-aineesta ja laimeneeko vasta-ainepitoisuus absorptiokäsittelyn aikana.

Absorptiolla punasoluvasta-aineet voitiin erottaa toisistaan ja eluaatiolla absorption tulos pys-tyttiin varmistamaan. Kun kyseessä oli anti-G-vasta-aine, tulokset osoittivat että C-positiiviset solut reagoivat D-positiivisia soluja vahvemmin. Vasta-ainepitoisuuksien ei myöskään todettu laimenevan merkittävästi absorption aikana. Johtopäätöksenä vahvojen vasta-aineiden kohdalla todettiin, että absorptiota voidaan tarvittaessa jatkaa, koska sen ei todettu heikentävän merkittävästi vasta-ainepitoisuuksia. Anti-G-vasta-ainetta voidaan epäillä, jos anti-D- ja anti-C-vasta-aineiden osalta todetaan samankaltaiset titterit. Kontrollisoluina tullaan jatkossa käyttämään entsyymillä käsittelemättömiä soluja.

The fetus inherits blood group factors from both parents. If maternal and fetal blood group factors diverge, the mothers immune system may be activated to produce antibodies against to fetal red blood cells. Most of the immunization during pregnancy cases are caused by anti-D antibody and mothers who give birth to a RhD-positive child, are at the risk of getting immunization. Since G-antigen is known to be present in almost all the D- and C-positive red blood cells, anti-G antibody has been found to interfere with the antibody detection of a D-negative mothers.

I conducted the empirical part of my study at the Blood Group Research Laboratory of the Finnish Red Cross, Blood Service. The samples for this study (n=17) were collected at a Finnish maternity welfare clinic and the patient samples. Anti-G antibody was separated with the alloabsorption method. Using the elution method, antibodies were removed in to an acidic buffer. Antibodies were identified using the ID-gel technique, and antibody concentrations were determined by titration. Control cells were treated with papain.

The purpose of my study was to design a method for the separation of anti-G (Rh) antibody from the anti-D (Rh) and anti-C (Rh) antibody combination. It was necessary to establish the criteria, of when an anti-G antibody test should be carried out and if antibody concentration was diluted during an absorption process.

The results showed that antibodies might be separated with the absorption method and using elution method, the result might be ensured. The results showed also that when a native sample of antibody concentration was similar to the anti-D and C, anti-G antibody might be present as well. Moreover, it was found that the antibody concentration was not diluted significantly during absorption.

The results lead to the conclusion that in the case of a strong antibody, absorption may be extended, if necessary, because the absorption does not significantly weaken antibody levels. In the future, this method may be used for control cells, which have not been treated with enzymes.