LC-MS/MS-menetelmän optimointi derivatisoitujen aminohappojen analysointiin
Frondelius, Annamaaria (2025)
2025
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2025120231702
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2025120231702
Tiivistelmä
Opinnäytetyö toteutettiin Helsingin yliopiston farmasian tiedekunnassa. Tutkimuksen tavoitteena oli optimoida derivatisoitujen aminohappojen analyysimenetelmä nestekromatografi-kolmoiskvadrupoli-tandemmassaspektrometrille.
Tutkimus perustuu jo aikaisemmin julkaistuun menetelmään, jossa analysaattorina toimi orbitrap-massaspektrometri, mutta menetelmä haluttiin siirtää kolmoiskvadrupoli tandemmassaspektrometrille. Tämän vaihdoksen uskotaan tuovan mittaukseen haluttua herkkyyttä.
Opinnäytetyö keskittyy tutkimaan 22:ta aminohappostandardia, jotka derivatisoitiin TMT0-leimoilla. Nestekromatografi optimoitiin LC-eluenteilla, mitä tarkasteltiin käyttäen QTOF-massaspektrometriä ja optimoitiin kolmoiskvadrupolitandemmmassaspektrometrillä. Optimointiin kuului kolonnin vertailu viidestä vaihtoehdosta, eluointi-gradientti, eluentti, kollisioenergia, desolvaatiolämpötila, desolvaatiokaasu sekä kapilaarin jännite. Näistä testattiin eri vaihtoehtoja ja signaalin voimakkuutta verrattiin toisiinsa ja etsittiin sopivimmat parametrit, jotka antoivat voimakkaan signaalikohina-suhteen sekä herkkyyden.
Käyttäen optimoituja olosuhteita 20 aminohappoa pystyttiin analysoimaan, niin pienellä pitoisuudella kuin 0,05 nM. Korkea herkkyys antaa potentiaalia biologisten näytteiden analysointiin.
Tutkimus perustuu jo aikaisemmin julkaistuun menetelmään, jossa analysaattorina toimi orbitrap-massaspektrometri, mutta menetelmä haluttiin siirtää kolmoiskvadrupoli tandemmassaspektrometrille. Tämän vaihdoksen uskotaan tuovan mittaukseen haluttua herkkyyttä.
Opinnäytetyö keskittyy tutkimaan 22:ta aminohappostandardia, jotka derivatisoitiin TMT0-leimoilla. Nestekromatografi optimoitiin LC-eluenteilla, mitä tarkasteltiin käyttäen QTOF-massaspektrometriä ja optimoitiin kolmoiskvadrupolitandemmmassaspektrometrillä. Optimointiin kuului kolonnin vertailu viidestä vaihtoehdosta, eluointi-gradientti, eluentti, kollisioenergia, desolvaatiolämpötila, desolvaatiokaasu sekä kapilaarin jännite. Näistä testattiin eri vaihtoehtoja ja signaalin voimakkuutta verrattiin toisiinsa ja etsittiin sopivimmat parametrit, jotka antoivat voimakkaan signaalikohina-suhteen sekä herkkyyden.
Käyttäen optimoituja olosuhteita 20 aminohappoa pystyttiin analysoimaan, niin pienellä pitoisuudella kuin 0,05 nM. Korkea herkkyys antaa potentiaalia biologisten näytteiden analysointiin.