Kalibrointi- ja kontrollinäytteiden matriisin valinta ja validointi fosfatidyylietanolin määritysmenetelmään

Abstract

Opinnäytetyö toteutettiin Synlab Suomi Oy:n keskuslaboratorion Huumaus- ja Lääkeaineosastolla. Työn tavoitteena oli löytää ja validoida stabiili matriisi kalibrointi- ja kontrollinäytteisiin fosfatidyylietanolin (PEth) LC-MS/MS-määritysmenetelmää varten. Työssä valmistettiin kalibrointinäytteitä kolmeen uuteen matriisiin sekä kontrollinäytteitä kahteen uuteen matriisiin. Ennen varsinaista validointia näytteiden valmistusprosessia optimoitiin, jotta kalibrointi- ja kontrollinäytteet saatiin mahdollisimman stabiileiksi ja toistettaviksi. Optimointi sisälsi erilaisten näyteputkityyppien testaamisen, jotta näytteiden valmistukseen löydettiin parhaiten soveltuvat näyteputket. Näytteiden esikäsittely tehtiin Flowbot One -pipetointirobotilla ja analysointi LC-MS/MS-laitteella, jonka ajomenetelmää optimoitiin.

Validointiparametreina tarkasteltiin menetelmän vertailua, satunnaisvirhettä, systemaattista virhettä, laajennettua mittausepävarmuutta, matriisivaikutusta, määritysrajaa sekä säilyvyyttä.

Kaikkien matriisien tulokset täyttivät validoinnille asetetut hyväksymiskriteerit, mutta matriisit 1 ja 3 osoittautuivat parhaiksi vaihtoehdoiksi kalibrointinäytteisiin. Kontrollinäytteistä matriisi 2 soveltui parhaiten silloin, kun kalibrointinäytteet oli valmistettu matriiseista 2 tai 3. Matriisista 3 valmistetut kontrollinäytteet puolestaan olivat sopivimmat, kun kalibrointinäytteet oli valmistettu matriiseista 1 tai 3.

Seuraavaksi laaditaan validointiraportti ja päivitetään menetelmäohje, minkä jälkeen uudet matriisit voidaan ottaa käyttöön fosfatidyylietanolin määritysmenetelmän kontrolli- ja kalibrointinäytteissä.