Hyppää sisältöön
    • Suomeksi
    • På svenska
    • In English
  • Suomi
  • Svenska
  • English
  • Kirjaudu
Hakuohjeet
JavaScript is disabled for your browser. Some features of this site may not work without it.
Näytä viite 
  •   Ammattikorkeakoulut
  • Metropolia Ammattikorkeakoulu
  • Opinnäytetyöt
  • Näytä viite
  •   Ammattikorkeakoulut
  • Metropolia Ammattikorkeakoulu
  • Opinnäytetyöt
  • Näytä viite

Improvement of the quality of insect-cell-derived, recombinant pro-VEGF-C

Uusitalo, Enni (2015)

Avaa tiedosto
Improvement _of _the_quality_of_insectcell_derived_recombinant_pro_VEGF_C.pdf (1.741Mt)
Lataukset: 


Uusitalo, Enni
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2015
All rights reserved
Näytä kaikki kuvailutiedot
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201505198960
Tiivistelmä
Tämän insinöörityön tarkoituksena oli parantaa hyönteissolujen tuottaman, rekombinantti pro-VEGF-C:n laatua. Korkealaatuista pro-VEGF-C:tä tarvitaan biolääketieteellisessä tutkimuksessa ja toistaiseksi sitä on saatavana vain rajallisissa määrin nisäkässolujen tuottamana. VEGF-C on viestimolekyyli, joka on välttämätön imusuoniston kasvulle. Sillä on myös keskeinen rooli monien sairauksien muodostumisessa ja siksi VEGF-C:n toimintaan kohdistettuja lääkkeitä kehitetään jatkuvasti.

Työ aloitettiin lisäämällä valmiiseen hyönteisekspressiovektoriin ampisilliini ja hygromysiini antibioottiresistenssigeenit yhdistelmä-DNA-tekniikalla, ja näin saatiin aikaan uusi vektori, pIZ-HygroA. PCR:llä monistettujen proteiinien calreticulinin, CDC37:n, PH4B:n, PDIA3:n ja syklofiliini B:n cDNA:t kloonattiin ensin TOPO vektoriin, jonka kautta uuteen pIZ-HygroA vektoriin. Nämä kyseiset proteiinit valittiin siksi, että niillä on ominaisuuksia, joiden oletetaan auttavan VEGF-C:n laskostumisessa. Uudet ekspressiovektorit transfektoitiin VEGF-C:tä tuottaviin hyönteissoluihin, joissa yllämainittujen auttajaproteiinien, sekä VEGF-C:n ilmentämistä ja laatua analysoitiin Western blot -menetelmällä, sekä bioanalyysillä, jolla mitataan VEGF-C:n aktiivisuutta.

Tutkimus saatiin suoritettua calreticulinin ja cyclophilin B:n osalta. Western blot -tulosten perusteella ei nähty eroa kovalenttisesti ja ei-kovalenttisesti sitoutuneiden VEGF-C dimeerien suhteessa ja hygromycin selektio näytti vaikuttavan alentavasti hyönteisolujen VEGF-C:n ekspressiotasoon. Ba/F3-VEGFR-3/EpoR-analyysissä kuitenkin nähtiin, että cyclophilin B:llä oli lievä vaikutus VEGF-C:n laatuun. Calreticulinilla vaikutusta ei havaittu. Tulosten varmistamiseksi, sekä tutkimuksen suorittamiseksi myös CDC37:llä, PH4B:lla ja PDIA3:lla tarvitaan kuitenkin vielä lisää tutkimuksia.
 
Kokoelmat
  • Opinnäytetyöt
Ammattikorkeakoulujen opinnäytetyöt ja julkaisut
Yhteydenotto | Tietoa käyttöoikeuksista | Tietosuojailmoitus | Saavutettavuusseloste
 

Selaa kokoelmaa

NimekkeetTekijätJulkaisuajatKoulutusalatAsiasanatUusimmatKokoelmat

Henkilökunnalle

Ammattikorkeakoulujen opinnäytetyöt ja julkaisut
Yhteydenotto | Tietoa käyttöoikeuksista | Tietosuojailmoitus | Saavutettavuusseloste