VAL201-peptidin vaikutus eturauhassyöpäsolujen signaalinvälitykseen

Abstract

Opinnäytetyömme tarkoituksena oli tutkia potentiaalisen eturauhassyöpälääkemolekyylin VAL201-peptidin vaikutusta eturauhassyöpäsolujen signaalinvälitykseen. Työn tilasi Oulun ammattikorkeakoulun tiloissa toimiva Valirx Plc:n tytäryhtiö Valirx Finland Oy. Työ toteutettiin yhteistyössä Oulun ammattikorkeakoulun ja Oulun yliopiston fysiologian laitoksen kanssa.

Työlle asetettiin tavoitteiksi tutkia, estääkö VAL201 Src-kinaasin aktivoitumisen androgeenien vaikutuksesta eturauhassyöpäsolulinjoissa, sekä selvittää Src:n soveltuvuutta merkkiaineeksi VAL201-lääkemolekyylin vaikutuksen seuraamiselle.

Työtä varten viljeltiin kahden eturauhassyöpäsolulinjan, PC-3- ja LNCaP-soluja, joille tehtiin hormonikäsittely lisäämällä testosteronia, synteettistä androgeeniä R1881, 5-α-dihydrotestosteronia tai β-estradiolia joko VAL201-peptidin kanssa tai ilman sitä. Solut hajotettiin ja määritettiin proteiinipitoisuus. Kaupallisella immunokemiallisella menetelmällä mitattiin fosforyloidun Src:n määrää hormoneilla stimuloiduissa ja stimuloimattomissa soluissa signaalireittien aktivoitumisen ja lääkemolekyylin vaikutuksen tutkimiseksi. Pitoisuuserojen havaitsemiseksi tuloksista muodostettiin pylväsdiagrammit.

Menetelmällä saadut tulokset jäivät negatiivisen kontrollin tasolle, eli tulokset olivat vain taustasignaalia. Koska Src:n signaalia ei saatu näkyviin, tutkimuksen tavoitteisiin ei päästy, eikä VAL201-lääkemolekyylin vaikutusta Src:in aktivoitumiseen voitu tutkia tämän työn perusteella.

Koejärjestelyä voitaisiin mahdollisesti yrittää optimoida Src:n signaalitason kasvattamiseksi. Käytetty kaupallinen menetelmä ei kuitenkaan välttämättä ollut luotettava fosforyloidun Src:n tutkimiseen, eikä Src ehkä ole paras mahdollinen merkkiaine VAL201-lääkemolekyylin vaikutukselle. VAL201:n vaikutuksen tutkimiseksi sekä sopivan merkkiaineen löytämiseksi tarvitaan lisätutkimuksia.

This thesis was contracted to us by Valirx Finland Oy and was part of Valirx Plc’s anti-cancer drug development project. The study was done at Oulu University of Applied Sciences and the Department of Physiology of Oulu University.

The aims of the study were to examine if a novel anti-cancer drug VAL201-peptide has an inhibitory effect on activation of Src induced by androgens in prostate cancer cells, and to assess the potential of Src as a marker protein for the effect of VAL201-peptide.

Two common prostate cancer cell lines PC-3 and LNCaP were cultured and treated with different hormones in the presence or absence of VAL201-peptide in varying exposure times. The cells were then lysed and the protein concentration was measured. The activation of cell signaling by hormones and the effect of VAL201 were investigated by measuring the amount of phosphorylated Src in stimulated and non-stimulated cells with a commercial immunoassay kit.

The immunoassay results remained on the level of the negative control. Since phosphorylation of Scr could not be seen in either stimulated or non-stimulated cells, the aims of the study could not be reached and the effect of VAL201-peptide on Src activation could not be examined based on this work.

The experiment could be optimized to increase the Src signal level. However, the commercial method used was not necessarily a reliable method for measuring phosphorylated Src. Also, Src may not be the best marker for the effect of VAL201-peptide. Further studies are needed to investigate the effect of VAL201 and to find a suitable marker for it.