Immunologisen vasta-ainetestin validointi

Abstract

Opinnäytetyön tavoitteena oli suorittaa immunologisen vasta-ainetestin validoiminen ja kartoittaa vasta-ainetestin eri osa-alueet. Testi, jonka pohjalta validointi suoritettiin, perustuu sydänmarkkeriproteiinin (NT-proBNP1-76) mittaamiseen ihmisnäytteestä. Sydänmarkkerit ovat sydänsolujen erittämiä peptidihormoneita, joita erittyy runsaasti sydämen ylikuormitustilassa. Työssä käytettiin kahta vasta-ainetta, jotka olivat hiiren anti-human NTpro-BNP57–76 (Fab32-1-1-fragmenttiklooni) ja vuohen anti-human NTproBNP12–28-seerumi (polyklonaalinen vasta-aineseos). Vasta-aineiden spesifisyyttä ja herkkyyttä tutkittiin Western blot -menetelmällä. Syrjäytymiskokeella tutkittiin synteettisten peptidien avulla vasta-aineiden sitoutumisominaisuuksia ja -hanakkuutta. Lisäksi vasta-aineille luotiin standardikuvaaja, jonka avulla voitiin määrittää näytteistä sydänmarkkeriproteiinia. Lisäksi työssä kiinnitettiin huomiota käytettyjen laitteiden ja välineiden toimintaan. Opinnäytetyö suoritettiin Oulun yliopiston, Biolääketieteen laitoksen fysiologian yksikössä. Menetelmän validoiminen onnistui hyvin, ja testin validoinnille saatiin luotua hyvä malli. Syrjäyttämiskokeesta ja Western blot -menetelmästä saadut tulokset olivat haluttuja ja varsin hyviä. Varsinkin vasta-aineen Fab32-1-1 herkkyys, spesifisyys ja syrjäytymisominaisuudet olivat erinomaisia. Lisäksi standardikuvaajan avulla saatiin määritettyä näytteiden pitoisuuksia ja tuloksia voitiin pitää luotettavina.