Kvalitatiivisten RT-PCR-menetelmien validointi ruokamyrkytysbakteerien osoittamiseksi
Siermala, Heidi (2012)
2012
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2023101827703
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2023101827703
Tiivistelmä
Opinnäytetyö käsittelee Salmonella spp.:n, Listeria monocytogenesin ja Campylobacter jejunin, colin ja laridisin tutkimista polymeraasiketjureaktiolaitteella eli PCR:llä. Opinnäytetyössä tehtiin kvalitatiivinen validointi RTPCR:lle Maintpartner Oy Laboratorio- ja ympäristöpalvelujen mikrobiologian laboratoriossa. Tavoitteena oli saada menetelmät validoitua, jotta ne voitaisiin ottaa käyttöön perinteisten viljelymenetelmien rinnalle.
Työ toteutettiin Agilent Technologiesin Stratagene Mx3005p -laiteella ja matriiseina käytettiin elintarvikkeita, vesiä ja rehuja. Opinnäytetyössä käytettiin työvaiheiden helpottamiseksi valmiita kittejä. Eristysvaiheessa käytettiin Qiagenin Dneasy mericon Food Kit -eristyskittiä ja RT-PCR-ajoissa käytettiin Qiagenin Pathogen Detection -kittejä. Vertailutulosten saamiseksi käytettiin myös perinteisiä viljelymenetelmiä RT-PCR -menetelmien rinnalla.
Työstä saatujen tulosten perusteella RT-PCR-menetelmät olivat valmiita käyttöön otettaviksi laboratoriossa. RT-PCR-menetelmät olivat huomattavasti tarkempia ja herkempiä verrattuna perinteisiin viljelymenetelmiin. RT-PCR -menetelmällä saataisiin etuna myös nopeampia analyyseja ja tarkempia tuloksia.
Työ toteutettiin Agilent Technologiesin Stratagene Mx3005p -laiteella ja matriiseina käytettiin elintarvikkeita, vesiä ja rehuja. Opinnäytetyössä käytettiin työvaiheiden helpottamiseksi valmiita kittejä. Eristysvaiheessa käytettiin Qiagenin Dneasy mericon Food Kit -eristyskittiä ja RT-PCR-ajoissa käytettiin Qiagenin Pathogen Detection -kittejä. Vertailutulosten saamiseksi käytettiin myös perinteisiä viljelymenetelmiä RT-PCR -menetelmien rinnalla.
Työstä saatujen tulosten perusteella RT-PCR-menetelmät olivat valmiita käyttöön otettaviksi laboratoriossa. RT-PCR-menetelmät olivat huomattavasti tarkempia ja herkempiä verrattuna perinteisiin viljelymenetelmiin. RT-PCR -menetelmällä saataisiin etuna myös nopeampia analyyseja ja tarkempia tuloksia.