Ridascreen Gliadin Competitive -menetelmän verifiointi gluteeniallergeenin määrityksessä : soveltuvuus ja tarkkuus olutnäytteiden analysoinnissa
Huhtamo, Sampsa (2025)
2025
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202503124137
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202503124137
Tiivistelmä
Työn tavoitteena oli verifioida Ridascreen Gliadin Competitive -menetelmän tarkkuus ja soveltuvuus olutjuomien gluteenipitoisuuden määrityksessä. Gluteenin luotettava analysointi on elintarviketurvallisuuden kannalta keskeistä, mutta oluen monimutkainen koostumus voi tehdä siitä haastavaa. Verifiointi suoritettiin sekä menetelmän käytännön sovellettavuuden arvioimiseksi että akkreditointivaatimusten täyttämiseksi.
Tutkimuksessa käytettiin Ridascreen Gliadin Competitive -menetelmää, joka perustuu kilpailevaan entsyymi-immunomääritykseen. Menetelmällä tunnistetaan osittain hajonneita peptidifragmentteja, joita perinteisillä analyysimenetelmillä ei välttämättä havaita. Menetelmän perustana on R5-monoklonaalinen vasta-aine, jolla tunnistetaan immunotoksisia gliadiinipeptidisekvenssejä.
Työssä tutkittiin pesukertojen vaikutusta gluteenianalyysin tarkkuuteen, ja kahden pesukerran todettiin vähentävän vaihtelua ja parantavan toistettavuutta ilman liiallista analyyttihävikkiä. Yhdellä pesukerralla taustasignaaleja ei saatu poistettua riittävästi, kun taas kolmella pesukerralla menetelmän suorituskyky heikkeni. Menetelmän lineaarisuus, toistettavuus ja uusittavuus vahvistettiin, ja saadut tulokset vastasivat odotettuja pitoisuuksia myös näytteissä, joihin oli tietoisesti lisätty gluteenia. Kontrollinäytteillä varmistettiin tulosten oikeellisuus, ja menetelmän todettiin olevan tarkka gluteenipitoisuuksien määrityksessä. The objective of this study was to verify the accuracy and applicability of the Ridascreen Gliadin Competitive method for determining gluten content in beer beverages. Reliable gluten analysis is essential for food safety; however, the complex composition of beer can present a significant challenge in gluten determination. Verification was conducted to assess both the practical applicability of the method and its compliance with accreditation requirements.
In this study, the Ridascreen Gliadin Competitive method was employed, relying on a competitive enzyme immunoassay. Through this approach, partially degraded peptide fragments, which may not be identified by conventional analytical techniques, are detected. The method is based on the R5 monoclonal antibody, which specifically recognizes immunotoxic gliadin peptide sequences.
The study examined the impact of the number of washing steps on the accuracy of gluten analysis, concluding that two washes reduced variability and improved repeatability without excessive analytical loss. With only one washing step, background signals were not sufficiently removed, whereas three washing steps compromised the method’s performance. Linearity, repeatability, and reproducibility were confirmed, and the obtained results corresponded to expected concentrations, even in samples to which gluten had been intentionally added. Control samples ensured result consistency and the study confirmed that the method is accurate for gluten quantification.
Tutkimuksessa käytettiin Ridascreen Gliadin Competitive -menetelmää, joka perustuu kilpailevaan entsyymi-immunomääritykseen. Menetelmällä tunnistetaan osittain hajonneita peptidifragmentteja, joita perinteisillä analyysimenetelmillä ei välttämättä havaita. Menetelmän perustana on R5-monoklonaalinen vasta-aine, jolla tunnistetaan immunotoksisia gliadiinipeptidisekvenssejä.
Työssä tutkittiin pesukertojen vaikutusta gluteenianalyysin tarkkuuteen, ja kahden pesukerran todettiin vähentävän vaihtelua ja parantavan toistettavuutta ilman liiallista analyyttihävikkiä. Yhdellä pesukerralla taustasignaaleja ei saatu poistettua riittävästi, kun taas kolmella pesukerralla menetelmän suorituskyky heikkeni. Menetelmän lineaarisuus, toistettavuus ja uusittavuus vahvistettiin, ja saadut tulokset vastasivat odotettuja pitoisuuksia myös näytteissä, joihin oli tietoisesti lisätty gluteenia. Kontrollinäytteillä varmistettiin tulosten oikeellisuus, ja menetelmän todettiin olevan tarkka gluteenipitoisuuksien määrityksessä.
In this study, the Ridascreen Gliadin Competitive method was employed, relying on a competitive enzyme immunoassay. Through this approach, partially degraded peptide fragments, which may not be identified by conventional analytical techniques, are detected. The method is based on the R5 monoclonal antibody, which specifically recognizes immunotoxic gliadin peptide sequences.
The study examined the impact of the number of washing steps on the accuracy of gluten analysis, concluding that two washes reduced variability and improved repeatability without excessive analytical loss. With only one washing step, background signals were not sufficiently removed, whereas three washing steps compromised the method’s performance. Linearity, repeatability, and reproducibility were confirmed, and the obtained results corresponded to expected concentrations, even in samples to which gluten had been intentionally added. Control samples ensured result consistency and the study confirmed that the method is accurate for gluten quantification.